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白以及红血球表面的胶体物质;②按18的比例取红血球(压积)和3%甲醛液(用pH72PBS稀释,预先冷却至4℃),缓慢混合,加胶塞4℃作用24h,不时摇动;③倾去上清液,再以12(V/V)加入36%~38%冷的(10℃)甲醛溶液,混匀,再放入4℃24h;④⑷离心去上清,以生理盐水反复洗涤4次。彻底清除甲醛液,最后以生理盐水配成10%悬液甲醛化红血球,加1/万硫柳汞防腐,4℃保存。戊二醛醛化过程:①取新鲜红血球,以生理盐水洗涤4次;②以015MolLpH72
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fPBS配成1%戊二醛溶液,4℃保存备用;③将100ml1%冰冷的戊二醛液加入到10ml~15ml红血球中,边加边搅拌(也可置电磁搅拌器上)30mi
;④离心去上清,以生理盐水洗涤4次,最后以PBS液(或生理盐水)配成10%悬液,加1/万硫柳汞,4℃保存。丙酮醛甲醛双醛化过程:①取新鲜红血球,洗涤4次,配成8%的悬液;②于红血球悬液中加等量的3%丙酮醛室温电磁搅拌16h~18h;③洗涤5次,再配成8%的悬液;④于红血球悬液中加等量的3%甲醛,电磁搅拌16h~18h;⑤洗涤5次,最后以pH72PBS配成10%的悬液,加1/万硫柳汞防腐,4℃保存。(3)醛化红血球的优点:①性质稳定,不影响红血球表面的吸附能力;②重复性好,易标准化。③可较长期保存,醛化后4℃保存,有效期可至1年,如冻干保存,有效期则更长。(4)影响醛化的因素:①红血球的洁净程度:由于红血球表面残留血浆蛋白和其它胶质,易引起自家凝集,所以一定要充分洗净;②红血球的浓度:醛化时应尽量使红血球稀释度低一些,以减少红血球的凝集和变形;③醛化时的温度与醛化红血球的质量有很大关系,一般认为最好是37℃。但有人认为应于4℃进行醛化;④醛化剂的浓度和醛化次数:醛化剂的浓度过大,易引起红血球皱褶,浓度过低,又会增加溶血机会,所以一般以3%醛化浓度为宜。家禽红血球一般醛化1~2次即可,而哺乳动物红血球醛化2次比醛化1次要好,敏感性高,保存时间也长。不同的双醛化,其抗原致敏作用有所不同,表5-1是各种双醛化法的结果比较。表5-1各种双醛化红细胞的结果比较
上海第六双醛化人民医院抗原滴度丙酮醛+甲醛戊二醛+丙酮醛丙酮醛+戊二醛
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首都医院抗原滴度2
11
国外资料抗原滴度2×106×106×10
666
脉冲/mi
5107~5118--
脉冲/mi
168421543750
222
171915
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脉冲/mi
是I标记的特异性抗体结合到细胞上的指标,脉冲数越大,结合抗体量也越多。但是从表5-1中可以看出结合量同可测出的抗r
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