第五章
间接凝集反应技术
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一、概述
（一）原理可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒（称为载体）表面上，当这些致敏的颗粒与相应的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应。载体的存在使反应的敏感性得以大大提高。间接凝集反应的优点为：①敏感性强：间接凝集反应是最敏感性的血清学反应方法之一，可以检测到微量的抗体和抗原；②快速：一般1h～2h即可判定结果，若在玻板上进行，则只需几分钟；③特异性强；④使用方便、简单。（二）载体具有吸附抗原（或抗体）的载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物的红血球、某些细菌等。良好载体有如下几点基本要求：①在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；②大小均匀；③比重与介质相似，短时间内不能沉淀；④无化学或血清学活性；⑤吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。目前应用最广的是人的O型红血球和绵羊红血球。而后者应用更广，因为其来源方便。另外绵羊红血球的表面有大量的（约1000个以上）糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好，且大小均匀一致。（三）间接凝集的分类1．根据载体的不同，可分为间接炭凝、间接乳胶凝集和间接血凝等。2．根据吸附物不同可分为间接凝集反应（吸附抗原）和反向间接凝集反应（吸附抗体）。3．根据反应目的不同，又可分为间接凝集抑制反应和反向间接凝集抑制反应。
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f4．根据用量和器材的不同又可分为试管法（全量法）、凹窝板法（半微量法）和反应板法（微量法）。
二、间接炭凝反应
（一）原理间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体，将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上，形成炭粉抗体复合物，当炭血清与相应的抗原相遇时，二者发生特异性结合，形成肉眼可见的炭微粒凝集块。目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。（二）材料与试剂1．炭粉炭粉粒子最好大小在012mm～015mm，目前市场上出售的炭粉均不合要求，必须过300目／寸的标准筛以300r／mi
离心去沉淀，再以3000r／mi
离心去上清，收集沉淀物。2．高免血清3．待测标本4．灭活兔血清5．正常血清6．标准抗原7．005molLpH72PBS液8．1％硼酸的PBS液（三）操作方法1．炭致敏取湿炭粉025g（干粉010g），加入经56℃～60℃灭活30mi
的稀释高免血清3ml，充分摇匀，置37℃致敏30mi
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