电化学发光免疫检测原理
电化学发光免疫测定的基本原理Electrochemilumi
esce
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oassayECLI
是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光ECL和免疫测定相结合的产物。它的标记物的发光原理与一般的化学发光CL不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNARNA探针检测。
2其检测原理以TSH检测为例第一步结合了活化的三联吡啶钌衍生物即RubpyN3羟基琥珀酰胺酯NHS的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。
第二步将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素
的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。
f2下一步，蠕动泵将形成的Rubpy抗体抗原抗体磁珠复合体吸入流动测量室，此3
时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的TSH抗体与生物素结合的和2与Rubpy结合的抗体也被吸出测量室。3
紧接着，蠕动泵加入含三丙胺TPA的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。发光2剂Rubpy和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的32Rubpy被氧化成三价，后者是一种强氧化剂另一方面，TPA被氧化成阳离子自由基TPA，3后者很不稳定，可自发失去一个质子H，形成自由基TPA，这是一种很强的还原剂，可将32一个电子给三价的Rubpy，使其形成激发态的Rubpy，而TPA自身被氧化成二丙胺332和丙醛。激发态的Rubpy通过荧光机制衰减，发射出一个波长620
m的光子，重新生成32基态的Rubpy。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光32强度，光强度与Rubpy的浓度呈线性关系故可测出待测抗原的含量。3
f最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。
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