血浆IgG的分离，纯化及鉴定实验报告
一、实验目的掌握盐析法的原理及盐析法分离制备血浆IgG的基本过程。二、实验原理1血浆IgG是免疫球蛋白（简称Ig）的主要成分之一，相对分子质量为1516万。要从身姿中分离出血浆IgG，首先要尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序，使血浆IgG在样品中比例大为增高，然后再纯化而获得血浆IgG。2盐析法是粗分离蛋白质的重要方法，许多蛋白质在纯水或低盐溶液中溶液度低，若稍加一些无机盐则溶解度增加，这种现象为盐溶。而当盐浓度继续继续增加到某一浓度时，蛋白质又变得不溶而自动析出，这种现象称为盐析。这现象的原理大致是由于蛋白质带有羟基解离的负电荷或氨基解离的正电荷，其极性基团使分子间相互排斥，同时与水分子形成水膜，这些因素保证了蛋白质不溶于水，当加入少量盐后，破坏水膜结构，增多了蛋白质的极性基团，蛋白质的溶解度增大，出现盐溶的现象，另一方面加入的盐离子中和蛋白质表面电荷，蛋白质分子相互蛋白质混合溶液中的各个成分分步盐析出来，达到分离目的蛋白质。3用硫酸铵分级盐析蛋白质时，盐析出某种蛋白质成分所需的硫酸铵浓度一般饱和度来表示。实际工作中将饱和硫酸铵溶液的饱和度为100或1。盐析某种蛋白质成分所需的硫酸铵数量折算成100或1的百分之几。即称为该蛋白质盐析的饱和度。4饱和度可以用饱和硫酸铵溶液法计算：在蛋白质要求达到50以下时采用：V＝V0（C2－C1）（1－C2）V0－－蛋白质溶液的原始体积C1－－所要达到硫酸铵饱和度C2－－原来溶液的硫酸铵饱和度三、试剂与仪器饱和硫酸铵溶液，001mollPH70的磷酸盐缓冲溶液，00175molLPH67的磷酸盐缓冲溶液四、实验步骤1取1支离心管，向其中加入5ml血浆和5ml001mollPH70的磷酸盐缓冲溶液，混合。向其中加入25ml饱和硫酸铵溶液，使其饱和度为20（加入过滴加边搅拌），加完后，应在4度放置15mi
，使之充分盐析，然后以3000rmi
离心10mi
，弃去沉淀（沉淀为纤维蛋白）2量取10ml清液体积，置于另一离心管，用滴管加入6ml饱和硫酸铵溶液，使其饱和度达到50，加完后，4度放置15mi
，以3000rmi
离心10mi
，弃去溶液，留下沉淀。3将所有的沉淀再溶于5ml001mollPH70的磷酸盐缓冲溶液后。滴加饱和硫酸铵溶液27ml，使其饱和度达到35，加完后，4度放置20mi
，以3000rmi
离心15mi
，上清液弃去，即制得粗制的IgG沉淀。4将上沉淀溶解于1ml00175molLPH67的磷酸盐缓冲溶液中。摇匀，然后配制成10mgml的IgG溶液1ml。5将配制好的gG溶r