生物化学实验报告
姓名：学号：专业年级：组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
f实验名称
血清清蛋白、γ球蛋白的分离、纯化与鉴定
实验日期
实验地点
合作者
指导老师
评分
XX教师签名李某某
批改日期20130603
格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，15倍行距；数字、英文用TimesNewRoma
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一、实验目的
1、掌握盐析法、凝胶层析法、离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法。2、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法。3、了解柱层析技术。
二、实验原理
1、粗提（盐析法）：蛋白质分子能稳定存在于水溶液中是因为有两个稳定因素：表面的电荷和水化膜。
当维持蛋白质的稳定因素破坏时，蛋白质分子可相互聚集沉淀而析出。盐在水溶液中电离所形成的正负离子可吸引水分子，从而夺取蛋白质分子上的水化膜，还可中和部分电荷使蛋白质分子聚集而沉淀，从而达到盐析沉淀蛋白质的目的。由于血清中各种蛋白质颗粒大小、所带电荷多少及亲水程度不同，因此，利用不同浓度的硫酸铵溶液分段盐析，便可将血清中清蛋白和球蛋白从溶液中沉淀出来，达到初步分离清蛋白、球蛋白的目的。2、脱盐（凝胶层析法）
凝胶层析法利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异。当溶液通过凝胶柱时，溶液中分子量较大的蛋白质因为不能通过网孔进入凝胶颗粒，沿着凝胶颗粒间的间隙流动，
f所以流程较短，向前移动速度较快，最先流出层析柱。而盐的分子量较小，可通过网孔进入凝胶颗粒，所以流程长，向前移动速度较慢，较晚流出层析柱。从而可达到去盐的目的。3、纯化（离子交换层析法）
离子交换是溶液中的离子和交换剂上的离子进行可逆的的交换过程。带正电荷的交换剂称为阴离子交换剂；带负电荷的交换剂称为阳离子交换剂。本实验采用的DEAE纤维素是一种阴离子交换剂，溶液中带负电荷的离子可与其进行交换结合，带正电荷的离子则不能，这样便可达到分离纯化的目的。
脱盐后的蛋白质溶液尚含有各种球蛋白，利用它们的等电点的不同可进行分离。血清中各种蛋白质的pI各不相同，因此，在同一醋酸铵缓冲液中，各蛋白质所带的电荷不同，可以通过DEAE离子交换层析将血清清蛋白和γ球蛋白分离出来。4、纯度鉴定（电泳）
采用醋酸纤维素薄膜电泳对分离得到的清蛋白和γ球蛋白进行纯度鉴定，以正常血清样品作对照。比较两者电泳图谱可定性判断纯化的清蛋白和γ球蛋白的纯度。
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