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抗原的特异性抗体的可变区。用表达有相应抗体分子的噬菌体颗粒去感染宿主菌,使该噬菌体颗粒得到扩增,将抗体可变区与恒定区组合得到具有完整功能的全人单克隆抗体。
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核糖体展示技术核糖体展示技术是一种完全在体外合成并筛选蛋白质的
技术。1994年,Mattheakis等建立了一种体外核糖体展示随机肽系统,将多肽库建立在多核糖体上,借助多核糖体在体外将基因型和表型联系起来。1997年,Ha
es和Phkthu
对多聚核糖体展示技术进行改进,建立了核糖体展示技术。该技术属于无细胞转化技术,不受细胞转染和表达系统的限制。其原理是利用聚合酶链反应扩增含目的基因的cDNA文库,同时引入启动子、核糖体结合位点即茎环结构,在转录翻译偶联系统作用下,形成“蛋白质核糖体mRNA”三元复合物,构成核糖体展示的抗体库,再用相应的抗原对翻译混合物进行筛选并从中分离mRNA,通过反转录聚合酶链反应富集目的基因,并将目的基因导入
f表达载体,从而获得库容量大、特异性强、亲和力高的人源基因工程抗体库。
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RNA多肽融合技术
RNA多肽融合技术又称为mRNA展示技术或是体
外病毒技术。1997年,Roberts和Szostak与Nemoto分别独立设计了这种与核糖体展示类似的方法。其原理是将抗体库中DNA转录成mRNA,含嘌呤霉素寡核苷酸的Li
ker将其与它所编码的肽或蛋白共价结合,形成mRNA嘌呤霉素蛋白复合物。与mRNA核糖体蛋白复合物相比,该复合物更为稳定,在4℃可完整保存10天左右,筛选到的抗体亲和性也比较高。
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基因工程小鼠制备全人抗体
制备全人抗体的基因工程包括人外周血淋巴细
胞严重联合免疫缺陷小鼠、基因小鼠和转染色体小鼠制备人抗体技术。人外周血淋巴细胞严重联合免疫缺陷小鼠是将已经产生免疫反应的供者或癌症患者的人的外周血淋巴细胞移植于严重联合免疫缺陷小鼠,经抗原免疫后可获得人源抗体。转基因小鼠制备的基本原理是将改建后的目的基因导入小鼠的受精卵,然后将此受精卵再植入受体动物的输卵管中,使其发育成携带有外源基因的转基因小鼠,在抗原的刺激下,该转基因鼠可分泌合成人抗体。由转基因小鼠产生的McAb经历了正常的装配和成熟的过程,产生的抗体具有较高的亲和力。转染色体小鼠是通过微细胞介导法将人14号染色体上产生的IgH的胚系片段和2号染色体上的550Mb的k轻链片段转染到ES细胞,获得小鼠经人血清清蛋白免疫后,可产生人血清清蛋白的人Ig,再次免疫后产生Ig。
2单克隆抗体技术的应用
单克隆抗体r
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