彬等9提出仅提取2次的前处理方法回收率在844～984，满足检测要求。但该方法省去了液液萃取步骤，需要真空浓缩，不能使用普通的减压旋蒸仪，对硬件要求较高。本试验加标回收发现，提取2次的提取回收率为420～710，明显低于提取3次的816～938，不能满足检测要求，因此，选择提取3次（表2）。
按照GBT203612006的方法使用二氯甲烷液液萃取净化2次，实际操作中，因为样品中脂肪等杂质影响，第2次萃取过程中经常出现乳化分层困难、有机相和水相混溶、倒置现象11，直接影响下一步旋转减压蒸馏，严重影响回收率和图谱基线（图5）。相比使用改进后方法（图3、图4），可以看出图5不同样品的基线和峰面积波动较大，直接影响检测结果。但如果不采用液液萃取分离水相和有机相，直接旋蒸浓缩提取剂，因提取剂中水分含量高，旋转减压蒸馏时特别容易出现爆沸。如果采取氮吹浓缩，因为提取剂量太多，提取剂大部分为乙腈且含水量高，耗时太长（至少1h）且很难吹干。该方法只使用20mL二氯甲烷液液萃取1次，节约了时间，避免因萃取水相和有机相分层困难、混溶、倒置造成的回收率损失。
23仪器方法的优化
fGBT203612006的方法流速为13mLmi
，容易造成色谱基线不稳定，影响目标物质的积分与定量（图5、图6）。改为10mLmi
后色谱基线相对平稳，对目标物质的积分影响较小（图7）。
3小结与讨论
比较了国标方法GBT203612006中孔雀石绿残留量不同提取次数和净化次数对回收率的影响，优化了前处理和色谱条件，将原方法提取4次、液液萃取净化2次的前处理操作减少为提取3次净化1次，同时将色谱方法的流速从13mLmi
降低为10mLmi
，节省了前处理时间和试剂用量，提高了检测效率，降低了基质干扰，避免了原方法液液萃取造成的提取剂乳化、分层困难和回收率、精密度偏低的情况，同时使色谱基线更加稳定，对目标峰积分的影响更小。改进后方法检测限由原国标方法的050μgkg降低为040μgkg，回收率由原国标方法的70～110提升至818～1008，精密度达到093～832，均达到并优于国标，值得普及推广。
参考文献：
1翟毓秀，郭莹莹，耿霞，等孔雀石绿的代谢极力及生物毒性研究进展J中国海洋大学学报，2007，37（1）：2732
2奇云水产品中的“三致”禁药非法食品添加剂“孔雀石绿”J家庭医学，2012，7（2）：53
3刘名扬，肖珊珊，于兵，等水产品中孔雀石绿和结晶紫残留检测技术的研究进展J食品安全质量检测学报，2015，6（1）：3540
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