高效液相色谱法测定水产品中的孔雀石绿
孔雀石绿为三苯甲烷类工业染料，在水产养殖上可以有效的预防与治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小虫病，并能保持水产品的新鲜度。但是若人体摄入孔雀石绿，将会对健康产生极为严重的危害。因此，对水产品必要要有严格的测定，以防止孔雀石绿对人体健康带来不必要的影响。一、材料与方法1试验材料。试剂有乙腈（德国默克，色谱纯）；孔雀石绿标准品（美国Sigma公司）；中性氧化铝固相萃取柱（supelco公司，1g3mL）；滤膜（上海安谱，045μm，有机相）。标准溶液：孔雀石绿标准品（01g，Sigma）；100μgmL标准储备液：称取孔雀石绿标准品10mg（精确到01mg），用乙腈溶解并定容于100mL容量瓶中；10μgmL标准中间液：吸取100mL标准储备液于100mL容量瓶中，用流动相定容；标准工作液：分别移取01、05、10、25、50mL标准中间液分装于100mL容量瓶中，用乙腈定容，制成10、50、100、250、500μgL标准系列浓度。仪器有高效液相色谱仪（LC20AB，岛津），配有荧光检测器；匀浆机（IKA，德国），漩涡混合器（IKA，德国）；离心机（Sigma3K30，德国）；超声波清洗器（KQ2200DB，昆山市超声仪器公司）；固相萃取仪（MEDIWAX，美国）；多样品自动浓缩
f仪（V700，BUCHI）；超纯水器（ariumcomfortI，sartorius）。2色谱分析条件。色谱柱：Varia
PolarisC185μm46mm×250mm；流动相：乙腈：乙酸铵缓冲液（80：20，vv）；流速10mLmi
；柱温30℃；激发波长265
m、发射波长360
m；进样量20μL。3样品的前处理。（1）提取。称量500g（精确至001g）试样于50mL离心管中，加入15mL乙腈，漩涡混合2mi
，10000rmi
匀浆提取30s，6000rmi
离心10mi
，取上清液至自动浓缩样品瓶中。另取一支50mL离心管，加入15mL乙腈，清洗匀浆机刀头，洗涤液转移至前一离心管。用玻璃棒捣碎离心管中的样品，漩涡混合2mi
，超声波提取10mi
，6000rmi
离心10mi
，上清液合并至自动浓缩样品瓶中。（2）浓缩。将上清液放入多样品自动浓缩仪，50℃下浓缩至近干，用5mL乙腈溶解残渣。（3）净化。中性氧化铝柱用5mL乙腈活化，样液过柱，用自动浓缩样品瓶收集流出液，5mL乙腈洗涤中性氧化铝柱，合并流出液。（4）浓缩。将上清液放入多样品自动浓缩仪，50℃下浓缩至近干，乙腈定容至1mL，u旋混匀，用045μm滤膜过滤，按照12的方法上机测定。二、结果与分析1提取液的选择。标准中选择乙腈及乙酸盐缓冲液提取，同时加入盐酸羟胺和对甲苯磺酸，虽然提取效果很好，但是试验表明，仅r