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、聚氯已烯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等相对分子质量分布分析及分离,常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶,洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。221凝胶渗透色谱法的原理凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质,部具有网状筛孔,利用球状凝胶的筛孔,使分子流过填充凝胶的管柱时,大分子无法进入凝胶筛孔,而只流经凝胶及管柱间的孔隙,很快就可以流出管柱,较小的分子因为进入凝胶的筛孔,故在管柱的停留时间较长,由此区分大小不同的分子,亦可与已知大小的分子作比较而定出一分子的分子量。一般状下,凝胶不会吸附成份,所有欲分离物质都会被洗出,这是凝胶层析法与其它层析法不同的地方。222凝胶渗透色谱法的分类目前常用的凝胶包括3个主要类型:1Polydextra
○Polydextra
的商品名称是Sephadex,它几乎不溶于溶剂中,亲水性强,能迅速在水和电解质溶液中膨胀,在碱性的环境中十分稳定,所以可以用碱去除凝胶上的污染物。Sephadex依其吸水量有不同型号,如G25、G75、G100或是G200,G后面的数字为凝胶吸水量再乘以10,以G25为例,表示1克干燥的G25凝胶可以吸水25ml。2Polyacrylamide○Polyacrylamide是一种合成凝胶,商品名BioGelP,干粉颗粒状,在溶剂中自动溶成胶体,依胶的分离范围不同,分成BioGelP2至BioGelP300,P后面的数字乘以1000为最大过滤限度。Polyacrylamide的化学性质不活泼,但它在极端的pH下会被水解,水解后产生的COOH具有离子交换的性质,因此pH值应尽量控制在210之间。3Agarose○商品名Separose,属于天然凝胶,依凝胶中干胶的百分含量,分为Sepharose2B,4B和6B。Agarosegel是一种大孔凝胶,主要用于像核酸或病毒这些分子量400000以上的物质,因其颗粒软,在分离过程有时会阻塞管柱,造成流速减慢,又因其在摄氏50度以上会融化,故需于较低温的环境中进行层析。Agarose做成beads后不能再脱水干燥,所以要在湿态中保存。223凝胶和管柱的选择凝胶的材质需为化学惰性,与分离物不能产生变性(de
ature)或是其它化学反应,最好具有能长期反复使用的稳定性,并可以在较大的pH和温度范围使用。由于凝胶上的离子交换基团会吸附带电荷的物质,产生离子交换的效果,所以凝胶上最好不具有离子交换的基团。此外,凝胶要有一定的机械强度,在层析过程中才不会变形,增加机械强度也可使层析在较高压力的环境进行,缩短分离时间。
f凝胶颗粒的粗细与分离效果有直接关系,颗粒细的分离效果好,但流速慢而费时,因此要依具实际的r
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