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要分离高聚物,可分析和纯化所需要的产品。211凝胶过滤色谱的原理3凝胶色谱依据尺寸分离蛋白质、缩氨酸和低聚核苷酸。分子通过多孔性珠床,较大程度或者较小程度地扩散到珠孔中。较小的分子更多的扩散到珠孔中因而会较慢地通过床层,而较大的分子较少或者不通过珠孔因而更快地通过床层。分子量和三维形状对保留度有贡献。凝胶过滤色谱可用于分子尺寸的分析,混合物中组分的分离,或者用于脱盐或者高分子制备中缓冲液的交换。ElgailiAOmer4认为GFC和其它绝对分子量确定设备联用是目前快速而间接确定聚合物分子量和分子量分布的最有效技术。他认为光散射检测器利用分子散射光的强度与分子量成正比,将折光检测器连结在光散射检测器之后,当每种馏分从GFC柱中洗脱出来时可测定其分子量。
凝胶过滤色谱柱的操作如图1所示,固定相包含惰性粒子,惰性粒子中有可控尺寸的小孔。显微镜检测发现粒子内部类似海绵。在连续流动的溶剂的影响下,含有各种分子尺寸的溶质的溶液可通过柱子。分子尺寸大于小孔的溶质分子不能通过凝胶小球,因此它们被限制在小球之间的空隙中。柱体积就大大变小。结果,比孔径大的分子洗脱很快。对能进出凝胶小球的小分子来说有很大的空间。它们通过柱层的路程延长。中等尺寸的分子以介于大分子和小分子之间的速度通过柱子。因此,一同溶质分子的洗脱顺序直接和分子大小相关5。对任何能过凝胶分离的溶质来说,排除率介于0100,可用有效分布系数(Kav)来表示,有效分布系数和床层体积(Vt)空隙体积(Vo)和洗脱体积(Ve)有关。其关系可用如下方程表示:
Kav
VeVoVtVo
Vt和Vo在特定的色谱条件下的固定的。因此随着特定溶质分子量的增加,Kav也增加。如果溶质的Kav相差很大,分配规律就很有效果,否则就很不明显。Kav不仅不分配效果的重要参数,而且是测定蛋白质分子质量的基础。对特定的凝胶类型来说,Kav与lgMr(Mr代表分子量)有线性关系,KavblogMrc,其中b和c为常数。我们也可以得到如下方程:Veb′logMrc′,其中b′和c′为常数。首先,我们可以在凝胶柱中分离分子量以知的一同蛋白质分子,然后用相同的凝胶柱测定其它未知的蛋白质分子。212凝胶过滤色谱的应用ScottMGordo
6等人用高分辨率的凝胶过滤色谱分离正常人体血浆得到17
f种含磷脂的分子。RajeshChaudhary7等人利用凝胶色谱促黄体激素进行提纯,得到了很好的效果。22凝胶渗透色谱(GPC)凝胶渗透色谱法主要用于有机溶剂中可溶的高聚物聚苯乙烯r
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