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需要来选择。对于分子量较小的物质,一般采用polydextra
或polyacrylamide材质的凝胶,大分子物质则使用agarose。以Sephadex为例,SephadexG50可用于区分分子量1500~30000之分子,而SephadexG75凝胶可区分分子量3000~70000之分子,所以若要分离分子量10000及20000之分子,两种都适用。如果要分离的分子大小相差很多,则可选用柱高:直径=5∶1~15∶1的管柱,且管柱体积要大于4~15倍的样品体积;如果要分离的物质之间分子量差异不大,则要选用柱高:直径=20∶1~100∶1的管柱,且管柱体积要大于25~100倍的样品体积。224凝胶的处理商品凝胶一般是干燥的颗粒,使用前要先泡在欲使用的洗液中,使它充份膨胀,否则有引起凝胶柱破裂的危险。热胀法是常用的前处理法,即把浸于洗液中的凝胶加热,让它膨胀并除去气泡,温度够高的话(加温至近沸腾)也可消毒杀菌。凝胶处理过程不能剧烈搅拌,如此易使颗粒破裂,影响流速。将凝胶入管柱的方法有很多种,实验室常用的方法是先在柱中加入约13体积的洗液,边轻轻搅拌边将凝胶悬浮液倒入其中,等到底部沉积约12公分的凝胶后,打开下方出口让水流出,上面不断加入悬浮液,等到沉积到离顶部约3~5公分处停止,让3~5倍柱床体积的缓冲液流过层析柱。若用polydextra
的凝胶,可放入有颜色的蛋白质(如cytochromec)流过管柱,看看色带是否均匀下降,不均匀或出现气泡,凝胶均需倒出重新填。冲洗缓冲液仅需留高于柱床2公分左右,多余的可用滴管吸去,再将出口打开使冲洗液流到距表面1~2公分,关闭出口,用滴管缓缓加入样品再打开出口,样品完全渗入凝胶后,加入约4公分冲洗液,出口处接上收集瓶开始层析。由于polydextra
和agarose都属于多糖类,一旦微生物生长过多,分泌的酶会水解凝胶使其性质改变,为了防止这种情发生,凝胶最好采用真空或低温保存,但温度不能过低使凝胶冻结。加入抑菌剂(chlohexidi
echlorbutolphe
ylmercuricsaltsNaOH等)也是常用的方法。长时间不用的凝胶可用干燥保存法,也就是把使用过的凝胶用水除去碎颗粒和杂质,再用不同浓度的酒精,由70、90到95逐步脱水,在摄氏60~80度下烘干,不能加热的Sepharose则用乙醚洗涤干燥。225凝胶渗透色谱法的应用Yo
gqi
gMa等人8利用凝胶渗透色谱法和固相萃取法对生物样本的萃取液净化以除去类脂化合物和其它干扰物质,获得了很好的效果。KaisuRRiihi
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等人9在10米长的低压的凝胶色谱柱利用葡聚糖凝胶LH20从越橘中制备r
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