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(十二烷基硫酸钠)以及反复冻融法配合超声震荡法等方法。
11DispaseⅡTrito
法1:将异种动物的皮肤置于25Uml的DispaseⅡ溶液中作用48h,使表皮与真皮组织分离,并且分解真皮组织内的IV型胶原和纤维粘蛋白,同时基底膜以及毛囊、汗腺周围的结缔组织遭到破坏。后浸于05的Trito
溶液中24h,而Trito
作为作为一种常用非离子型的表面活性剂,其主要作用是结合膜蛋白破坏细胞膜的完整性,从而使细胞溶解,目前应用的Trito
主要为Trito
X100。此法制备的ADM细胞清除率较高,但对基底膜的破坏程度较大,不利于移植后的再上皮化。
12高渗盐水SDS法2:将皮肤组织置于1molL的NaCl溶液中保存24h,利用盐水的高渗透性破坏锚着细丝与基底细胞之间的半桥粒,从而使表皮与真皮分离。后于室温下浸于05的SDS溶液中震荡1h,SDS作为一种阴离子表面活性剂,可以清除真皮组织中的细胞成分。此法制备的ADM细胞成分少,基底膜比较完整,但Ⅳ型胶原、HLADR含量较高,因此抗原性较高。
13反复冻融法配合超声震荡法3:将异种皮肤置于液氮中反复冻融3次,每次5mi
,然后于3的盐水中浸泡30mi
后置于超声振荡仪中洗脱72h。此法制备的ADM物理性能高,保留了完整的真皮基质,同时细胞成分含量低。
14辅助技术:为了提高ADM的性能在上述制备方法的基础上增加了一定的辅助技术。
141与交联剂联合:目前常用的交联剂主要为戊二醛,国内的姜笃银4等人在1999年就提出经戊二醛交联后的ADM其组织抗原性显著下降,并且抗降解的性能明显增强,并认为这是由于戊二醛的“占位性”现象,而这种“占位性”的本质可能就是醛基(CHO)的毒性作用5。同时通过实验证明6将ADM与戊二醛交联后能有效地防止异种移植物的超急性排斥反应,发挥真皮支架作用、减轻迟发性异种排斥反应。之后车鹏程7等人通过实验进一步证明,通过戊二醛交联10~15mi
既能降低ADM的免疫炎性反应,减缓胶原降解,又可使交联型ADM的细胞毒性降低至最低。此外邵阳8等人使用基质金属蛋白酶7(MMP7)以及天然交联剂京尼平处理后,使用真空冷冻干燥方法制备得到的低免疫原性的ADM具有细胞毒性低,细胞相容性好等特点。同时,安祥莲9等人使用戊二醛将羧甲基壳聚糖与脱细胞真皮基质进行交联,制备的ADM不但具有一定的抗菌性能还具备良好生物相容性。
142NaOH处理:孙红10等人采用高渗盐溶液(NaOH)消蚀法制备ADM,使用此方法制备的ADM免疫原性低,无明显排斥反应,组织相容较好。王灵平11等则发现在常规制备r
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