）NucleaseFreeWater：4微升。（2）EMSAGelShift结合缓冲液5X：2微升。（3）细胞核蛋白或纯化的转录因子：2微升。（4）目的蛋白特异抗体：1微升。（5）标记好的探针：1微升。（6）总体积：10微升。2按照上述顺序依次加入各种试剂，在加入标记好的探针前先混匀，并且室温2025℃放置10分钟，从而消除可能发生的探针和蛋白的非特异性结合，或者让冷探针优先反应。然后加入标记好的探针，混匀，室温2025℃放置20分钟。3加入1微升EMSAGelShift上样缓冲液无色，10X，混匀后立即上样。注意：有些时候溴酚蓝会影响蛋白和DNA的结合，建议尽量使用无色的EMSAGelShift上样缓冲液。如果对于使用无色上样缓冲液在上样时感觉到无法上样，可以在无色上样缓冲液里面添加极少量的蓝色的上样缓冲液，至能观察到蓝颜色即可。五、电泳分析1用05XTBE作为电泳液。按照10V厘米的电压预电泳10分钟。预电泳的时候如果有空余的上样孔，可以加入少量稀释好的1X的EMSA上样缓冲液蓝色，以观察电压是否正常进行。2把混合了上样缓冲液的样品加入到上样孔内。在多余的某个上样孔内加入10微升稀释好的1X的EMSAGelShift上样缓冲液蓝色，用于观察电泳进行的情况。3按照10V厘米的电压电泳。确保胶的温度不超过30℃，如果温度升高，需要适当降低电压。电泳至EMSAGelShift上样缓冲液中的蓝色染料溴酚蓝至胶的下缘14处，停止电泳。4剪一片大小和EMSA胶大小相近或略大的比较厚实的滤纸。小心取下夹有EMSA胶的胶板，用吸水纸或普通草纸大致擦干胶板边缘的电压液。小心打开两块胶板中的上面一块注：通常选择先移走硅烷化的那块玻璃板，把滤纸从EMSA胶的一侧逐渐覆盖住整个EMSA胶，轻轻把滤纸和胶压紧。滤纸被胶微微浸湿后大约不足1分钟，轻轻揭起滤纸，这时EMSA胶会被滤纸一起揭起来。把滤纸侧向下，放平，在EMSA胶的上面覆盖一层保鲜膜，确保保鲜膜和胶之间没有气泡。5干胶仪器上干燥EMSA胶。然后用X光片压片检测，或用其它适当仪器设备检测。
其他
一、常见问答
1什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA复合r