中:在色谱中,对照品饱和槲皮素标准品乙醇溶液有明显显色现象,饱和芦丁标准品乙醇溶液显色不明显;样品饱和芦丁自制品乙醇溶液有显色,但其显色最高点和槲皮素显色点高度不一致,最低点显色不明显。
六、分析与讨论
1、芦丁颜色正常,因为粗芦丁中海混有杂质,所以颜色较精制后芦丁深。2、精制芦丁产率较低,可能是因为:乘热抽滤时溶液温度下降,芦丁析出留在滤纸上;还有部分芦丁未从槐花米中煮出;芦丁转移过程中损失等等。3、实验所需槐花米粉碎太细,导致抽滤十分缓慢,因而本实验后来用纱布代替滤纸。4、本来还应有一个粗产率,但因为实验考虑不周全,没有测定粗芦丁质量,所以芦丁粗产率无法计算得到。5、纸色谱显色:饱和芦丁标准品乙醇溶液所有组都没有显色,可能是制备标准溶液时芦丁浓度太低;槲皮素显色正常,没有问题;样品饱和芦丁自制品乙醇溶液显色不明显,可能是精制芦丁混有杂质。
分光光度法测定蔬菜蔬菜总铁量实验2分光光度法测定蔬菜总铁量
一、目的要求
(1)学习邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法,掌握分光光度计的使用。(2)掌握标准曲线的绘制方法。(3)掌握样品的灰化方法及高温炉的使用。
二、实验原理
在紫外可见区电磁辐射的作用下,多原子分子的价电子发生跃迁,从而产生分子的吸收光谱。各种物质的分子都有其特征的吸收光谱,以此来获得定性的信息。而在选定波长下测量吸光度A与物质浓度c的关系,可对物质进行定量测定。分光光度法测定的基本原理是依据朗伯比尔定律,即
AlgTlg
I0KclI
式中T为透光率;I0为入射光强度;I为透射光强度;l为吸收池厚度;c为浓度;K为吸光系数。当入射光波长及吸收池厚度一定时,在一定浓度范围内,有色物质的吸光度A与该物质的浓度
c成正比。
用分光光度法测定物质的含量,一般采用标准曲线法,即配制一系列浓度由小到大的标准溶液,在指定条件下依次测量各标准溶液的吸光度,在一定浓度范围内,溶液的吸光度与其浓度呈直线关系。以溶液的浓度c为横坐标、相应的吸光度A为纵坐标,在坐标纸上绘制标准曲线。测定未知试样时,操作条件与标准曲线上的相同,根据测得的吸光度从标准曲线上查出相应的浓度,就可计算出试样中被测物的含量。测定时通常以试剂空白溶液为参比溶液,调校仪器的吸光度零点,即100
2
f透光率。邻二氮菲也叫邻菲啉,是测定微量铁(Ⅱ)的灵敏度高的显色剂,在pH2~9的溶液中,邻
2+
二氮菲与Fe生成稳定的橙红色配合物。该配r