石蜡切片和HE染色
精心整理
1、取材
颈椎脱臼处死小鼠,打开腹腔,剪去肝组织(或其他组织)。切取得组织不宜太大,以利于固定剂穿透,通常以5mm5mm2mm或10mm10mm2mm为宜。取下所需要的肝组织,切成一小块23mm厚。
注意事项:⑴取材动作要迅速,不宜作太久的拖延一面组织细胞的成分、结构等发生变化。⑵切片材料应根据需要观察的部位进行选择,尽可能不要损伤所需要的部分。
2、固定
将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下,立即投入4多聚甲醛中固定,固定3050mi
。注意事项:⑴一半固定液,都以新配好为好,配好后应储存在阴凉处,不宜放在日光下,以免引起化
学变化,失去固定作用⑵有些混合固定液的成分之间会发生氧化还原作用,一定要在使用前才混合,如果混合太
早,失去时就没有作用了⑶固定材料时,固定液必须充足,一般为材料块的2030倍,有些水分多的材料,中间应
更换12次新液⑷材料固定完成后,保存于严密紧塞或加盖的容器里,同时在容器外加上标签,并随同材
料在溶液中投入相应的标签,一面相互混淆。标签上注明固定液、材料来源、日期等。标签上的文字,应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。
3、脱水
50→70→80→95→100→100酒精。每个05h。注意事项:⑴脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行,防止吸收空气中的水分⑵在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料以免损坏,可用吸管吸出器皿中的脱水剂,
再用吸水吸尽器皿内剩余液,然后于皿中加入高一级脱水剂⑶在低浓度酒精中,每级停留不宜太长,否则易使组织变软,助长材料的解体
f精心整理⑷在高浓度或酒精中,每级停留的时间也不宜太长,否则会使组织变脆,影响切片。⑸如需过夜,应停留在70酒精中⑹脱水必须彻底,否则不易透明,甚至使透明剂内出现白色浑浊现象。
4、透明
12二甲苯12无水乙醇(20mi
)→纯二甲苯Ⅰ(15mi
)→纯二甲苯Ⅱ(25mi
)。由于乙醇与石蜡不相溶,而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡,所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时,光线可以透过,组织呈现出不同程度的透明状态。注意事项:⑴使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分进入。⑵更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料快干涸,另一方面能避免吸收湿气。⑶在透明过程中,如果材料周围出现白色雾状,说明材料中的水未被脱干净,应退回纯酒
精中重新脱水,然后再透明。
5、浸蜡
将处理的材料置于12石蜡12二甲苯中,56℃s水浴锅40mi
。再放入石蜡Ⅰ90r