mi
、Ⅱ90120mi
。透蜡的目的是除去组织中的透明剂,使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便包埋。透蜡时间根据组织大小而定。透蜡应在恒温箱中进行,并保持箱内温度在5560℃左右,注意温度不要过高,以免组织发脆。一般置于恒温箱05h。
注意事项:⑴尽量保持在较低温度中进行,以石蜡不凝固为度;⑵透蜡温度要恒定,不可忽高忽低;⑶操作要迅速,力求在最短的时间内完成石蜡透入过程,以免引起组织变硬、变脆、收缩
等。
6、包埋
先提升恒温箱的温度至60℃,换纯蜡3次,每次12h,用包埋盒至于60℃的烫板上,倒入材料,摆放好材料,吧标签正面向外置于底部,补足石蜡,倒好后轻轻的置于冷水盆中,注意底面要接触盆中凉水,待石蜡全部凝固后可取出晾干,也可在凉水盆中放置过夜。
7、切片
①将已固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。②将切片刀固定在刀夹上,刀口向上。③摇动推动螺旋,使石蜡与刀口贴近,但不可超过刀口。
f精心整理④调整石蜡块与刀口之间的角度与位置,刀片与石蜡切片约15度左右。⑤调整厚度调节器到所需的切片厚度,一般为410微米⑥一切调整好后可以开始切片。⑦切成来的蜡带到2030cm长时,右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起,以免卷曲,并牵引成带,平放在蜡带盒上,靠刀面的一面较光滑,朝下,较皱的一面朝上。⑧用单刀面切去蜡块一小段,放在载玻片上加水一滴,置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。⑨切片工作结束后,应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡,把切片机擦拭干净妥善保管。
8、粘片
将粘贴剂置薄玻片,再取切片浮值粘片剂上,然后置烘片台上,使切片展开烫平,材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好,用滤纸吸去多余水分,同时以记号笔在玻片上编号,放入温箱中烘干,温度为3040℃过夜。
9、脱蜡和染色
纯二甲苯(1020mi
)→纯二甲苯(510mi
)→12二甲苯12纯酒精→100纯酒精→95酒精→85酒精→70酒精→50酒精→自来水冲洗10s→切片放入苏木精中染色约1030mi
→用自来水流水冲洗约15mi
使片变蓝。
10、分化和漂洗
将切片放入1盐酸乙醇液中褪色,约至2s至数秒。见切片变红,颜色较浅即可。切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。
11、脱水Ⅰ和复染
切片如50乙醇→70乙醇→80乙醇中各35mi
。用05一红乙醇液对比染色13mi
。
伊红主要染细胞质,着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合,如果细胞核染色较浓,细胞质也应浓染,以获得鲜明的对比。反之,如果细胞核染色较浅,细胞质也应r