ml1）20μl，C组给予ADGFP（病毒滴度为10×109pfuml1）20μl，D组给予等量的磷酸盐缓冲液骨蜡封闭耳蜗底转，抗生素冲洗中耳腔3次，部分局部放置氧氟沙星明胶海绵预防感染。骨蜡封闭听泡骨孔，逐层缝合伤口。所有操作应严格遵守无菌原则。16特异性免疫反应测试采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定特异性抗体。分别于免疫前和末次免疫后2周进行。心脏采血，分离血清。用100μgml1的CIEAgs溶液包被ELISA板，于4℃过夜并封闭，加入1∶10稀释的豚鼠血清37℃下孵育2h，洗板4次，加入1∶2000稀释的辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌蛋白AStaphylococcalprotei
AHRP，SPAHRP）37℃下孵育1h，洗板4次，以邻苯二胺过氧化氢溶液为底物显色10mi
后用H2SO4终止显色，在酶标仪下测定波长为490
m的吸光度A值。17听觉脑干诱发电位（auditorybrai
stemrespo
se，ABR）测试分别于免疫前、末次免疫后2周和鼓阶内注射后（1周），采用听觉诱发电位测试系统，豚鼠头顶冠状缝与矢状缝交界处插入针形电极作为测试电极，参考电极置于耳廓后方靠近乳突尖，接地电极置于对测乳突，刺激声信号采用Click，重复频率为11次mi
1，叠加2048次，记录时程10ms，测定Ⅲ波的阈值、潜伏期和波幅。18内耳光镜观察各组听觉测试后各取3只豚鼠，麻醉后断头，立即取出颞骨，打开听泡，放置于4多聚甲醛固定液中，12h后换EDTA脱钙7～10d，修剪后流水冲洗1～2h，常规脱水、透明、浸蜡、定向包埋。耳蜗中轴切片，片厚5μm，漂片、捞片、粘片，常规HE染色，封片，光镜观察。19免疫组织化学试验191内耳石蜡包埋各组于听觉测试后各取豚鼠3只，麻醉、断头，迅速取颞骨，打开听泡，放置于4多聚甲醛固定液中，用针挑开圆窗，在蜗尖钻一小孔，快速灌注数次，固定12h，采用EDTA脱钙7～10d，修剪后流水冲洗1～2h，常规脱水、透明、浸蜡、定向包埋。192免疫荧光化学试验将C组2只动物的颞骨蜡块行耳蜗中轴切片，片厚5μm，漂片、捞片、粘片后常规脱蜡至水，在倒置荧光显微镜下观察和摄片。193酶免疫组织化学试验按上述方法获得切片，用胰酶（02）修复抗原，余具体步骤：正常山羊血清封闭10mi
加PBS稀释的第一抗体（A组加入兔抗鼠FASL，B组加入兔抗鼠IL10，C、D组加入兔抗鼠FASL和兔抗鼠IL10两种抗体），4℃过夜，PBS洗5mi
×3次，加入HRP标记的SPA作为二抗，37℃孵育30mi
，PBS洗5mi
×3次，DAB染色，封片剂封片，光学显微镜观察摄片。以上试剂均购买自武汉博士德生物工程有限公司。110内耳透射电镜观察各组听觉试验后各取r