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能使用水浴锅;56211在离心柱的膜上方小心加入72℃预热的洗脱液50ul,盖紧管盖,室温静置1分钟后,14000g离心1分钟。离心管内即为核酸溶液,立即使用或放于20℃备用。563排版:根据样本数量编写《PCR实验室DA-7600取试剂、加样、扩增对照图面版表》,注意添加阴性质控,阳性质控。564加样:5641配制HCV单人份扩增体系:取N个(N待检样本个数阴性质控平阳性质控品)PCR反应管,按下表进行配制:
组分HCV反应液HCV反应液总体积
A
B
用量
27ul
3ul
30ul
P6
f丙型肝炎病毒(HCV)核酸定量检测标准操作规程(PCR荧光探针法)
将各组分充分混匀,混合好后进行短时离心将管壁上的液体全部离心至管底,之后将30ul扩增体系分装到PCR反应管管中。
5642根据排版,往上述PCR反应管中加入对应的样本核酸各20ul。盖紧管盖,瞬时离心后上机进行扩增。
565DA7600的设置及结果分析:参见《达安7600荧光定量PCR仪操作、校准及保养规程》及《基因扩增检测及结果分析规程》。
566记录实验数据。567取出结束后扩增仪内扩增产物需用一次性手套包好、封口后,丢入医疗废物垃圾桶内,以防止扩增管破裂而导致污染。568关闭扩增仪电源和计算机电源。57注意事项:571PCR荧光检测法比较容易受污染,所以实验过程中应避免反复开盖,所用耗材均需高压灭菌。572RNA提取步骤建议冰上操作。吸取血清时注意勿带入红细胞。573试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融。574RNA提取液A必须充分混匀后吸取,RNA提取液B需溶解混匀后使用。575逆转录成cDNA后,需马上进行下一步实验,否则须转移上清至灭菌离心管,保存于20℃待用。58安全防护措施:581试剂处理:
P7
f丙型肝炎病毒(HCV)核酸定量检测标准操作规程(PCR荧光探针法)
5811使用或更换试剂时,务必戴手套;不要用身体直接接触试剂,以免损伤皮肤。
5812如果皮肤接触了试剂,立即用大量清水冲洗并消毒。5813如果眼睛接触了试剂,立即用喷淋器冲洗,并紧急就医。582仪器使用:5821仪器运转中不要触摸加样机构、试剂分注机构、搅拌机构、反应容器清洗机构等可动部分。5822仪器通电时不能打开仪器上面、背面、侧面的盖板,不能触摸光源灯的玻璃面。583生物安全防护:参见《生物安全防护手册》6相关记录表格61LABSOPPCR005T01001《PCR实验室实验、交接班记录表》62LABSOPPCR015T01001《PCR实验室迟发报告登记表》63LABSOPPCR014T01001《PCR实验室不合格标本登记表》64LABSOPPCR025T01001《PCR实验室DA-7600取试剂、加样、扩增r
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