人乳头瘤病毒1618型核酸检测标准操作规程（PCR荧光探针法）
1目的：规范人乳头瘤病毒（HPV）1618型核酸检测操作流程，保证检测结果的准确性。2应用范围：PCR实验室。3职责：31文件编写：实验室技术员。32文件审核：实验室主管。33文件审批：实验室主任。34执行：PCR实验室所有工作人员。4参考文献：41《中山大学达安基因股份有限公司人乳头瘤病毒（HPV）1618型核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒说明书》42《中山大学达安基因股份有限公司DA7600核酸序列检测系统用户手册》5内容：51检测方法：PCR荧光探针法。52实验原理：采用一对特异性引物和一条特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测，从而定量检测人乳头瘤病毒（HPV）1618型DNA。主要用于人乳头瘤病毒（HPV）1618型感染的辅助诊断及其疗效监测的标准。53性能参数：531检测下限：50×10基因拷贝ml。532线性范围：50×10～50×10基因拷贝ml。54标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集。541标本类型：泌尿生殖道分泌物棉拭子、生殖道刮片、组织活检标本等。5411男性尿道分泌物：用细小棉拭子伸入尿道约2～4厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌试管中，密封送检（采集分泌物前2小时禁小便）。5412女性生殖道分泌物：用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用宫颈刷或无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒后旋动宫颈刷或棉拭子采集宫颈分泌物，将宫颈刷或棉拭子置于无菌试管中，密封送检。5413女性尿道分泌物：用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2厘米，捻动拭
282
f子采集分泌物，将棉拭子置于无菌试管中，密封送检。5414生殖道刮片：用刮片刮取宫颈病灶处脱落细胞，置于无菌玻璃管中，密封送检。5415组织活检标本（包括宫颈组织、外阴组织、尖锐湿疣疣状组织等）：取可疑组织适量置于无菌玻璃管中，密封送检。542标本保存：标本采集后保存于2～8℃。543运送条件：标本运送采用冰壶。55设备和试剂：551设备：DA7600荧光定量PCR仪、低速水平离心机、生物安全柜、台式高速离心机、移液器、混匀器、恒温水浴箱干式恒温器、冰箱（4℃、20℃）、移动固定紫外灯、冷冻离心机。552试剂：5521试剂品牌：《中山大学达安基因股份有限公司人乳头瘤病毒（HPV）1618型核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒》。5522试剂组成：DNAr