浓度太高而在解冻24小时后死去。③adhere
ttumorli
es5～7×106，依细胞种类而异。Ade
ocarci
oma解冻后须较
f高之浓度，而HeLa只需1～3×106cellsml④othersuspe
sio
s5～10×106cellsml，huma
lymphocyte须至少5×106cellsml。（5）冷冻保护剂浓度为5或10％DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backupculture，以防止冷冻失败。（6）冻存可用10～90的血清，一般高浓度血清有助于维护细胞活力，此处介绍20终浓度有利于细胞悬浮而少沉积（4度时），复苏存活率在80～90以上，对原代培养细胞，以90血清冻存更为有效。
二、冷冻细胞活化
1、冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。2、细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常例如产生单株抗体或是其它蛋白质。3、材料37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管离心管培养瓶、液氮或干冰容器4、步骤：（1）操作人员应戴防护面罩及手套，防止冷冻管可能爆裂之伤害。（2）自液氮或干冰容器中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，由于热胀冷缩过程，此时盖子易松掉。（3）将新鲜培养基置于37℃水槽中回温，回温后喷以70酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。（4）取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，以70酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。（5）取出解冻之细胞悬浮液，缓缓加入有培养基之培养容器内稀释比例为110～115，混合均匀，放入CO2培养箱培养。取01ml解冻细胞悬浮液作存活测试。（6）解冻后是否立即去除冷冻保护剂例如DMSO或glycerol，依细胞种类而异，一般而言，大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除，则将解冻之细胞悬浮液加入含有510ml培养基之离心管内，离心1000rpm，5分钟，移去上清液，加入新鲜培养基，混合均匀，放入CO2培养箱培养。（7）若不需立即去除冷冻保存剂，则在解冻培养后隔日更换培养基。
三、细胞计数与存活测试
1、原理：（1）计算细胞数目可用血球计数盘或是Coultercou
ter粒子计数器自动计数。（2）血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为01mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×01mm10x104ml。使用时，
f计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml中之细胞数目。
（3）存活测试之步骤为dyeexclusio
，利用染料会渗入r