量大小，分子形状，分子性质，带电荷量，分子直径。外因：电场强度，溶液PH，溶液黏度，离子浓度，缓冲液性质。2琼脂糖凝胶聚合原理：依靠琼脂糖上的羟基，在聚合过程中，羟基与羟基上的氢键的聚合。3PAGE的组成，聚合原理及聚合方式［1］组成：丙烯酰胺（单体）和甲撑双丙烯酰胺（双体交换剂）组成。［2］原理：丙烯酰胺（单体）和甲撑双丙烯酰胺（双体交换剂）为材料，在催化剂作用下，聚合为含酰胺基侧链的脂肪族长链，在相邻长链之间通过甲撑桥连接而形成的三维网状结构物质。［3］聚合方式：（1）化学聚合法：加入过硫酸铵，当丙烯酰胺，交联剂，四甲基乙二胺的水溶液中加入过硫酸铵，立即产生自由基，丙烯酰胺与自由基作用，随之活化。（2）光催化法：B2作为催化剂，光聚合过程在光激发下催化完成，核黄素在氧及紫外线作用下，生成含自由基的产物，与上述AP作用相同。4PAGE分离样品时的三种效应：浓缩效应，分离效应，电荷效应。5SDSPAGE电泳变性凝胶电泳主要成分的作用：（1）甘油或蔗糖：密度大，与样品结合，不发生漂样。（2）SDS与蛋白质结合，破坏高级结构，破坏氢键，去除蛋白质带电荷差异。（3）巯基乙醇：破坏二硫键，使完整结构变松散。（4）溴酚蓝：电泳指示剂。
f6等电聚焦电泳基本原理：小分子进入凝胶内部，流下时路程较长，而大分子物质却被阻排在外部，下来的路程短。7等电聚焦电泳的基本原理：蛋白质等电点不同，在同一PH下带电荷量不同从而进行分离。82D－PAGE的操作顺序：先等电聚焦电泳，再SDSPAGE9Wester
blotti
g的操作步骤：（1）对蛋白质样品电泳分离（2）转膜（3）封闭（4）加入一抗与目的蛋白结合（5）加二抗（6）洗膜（7）膜的光分析。
第四章沉淀法
一相关概念：
1沉淀：溶液中的物质由液相变成固相析出的过程。
二知识点：
1制备蛋白质常用的沉淀方法（1）盐析法：中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性；加入中性盐后，破坏了水膜暴露出疏水区域；同时又中和了电荷，破坏了亲水胶体。（2）有机溶剂沉淀法：破坏蛋白质分子表面水化膜；降低水溶液的介电常数，增加蛋白质分子间的相互作用而使溶解度降低。（3）蛋白质沉淀法（4）聚乙二醇沉淀法：有机物与生物大分子发生共沉淀；使生物大分子脱水而发生沉淀；空间位置排斥将生物大分子挤在一起（5）选择性沉淀法：根据各种蛋白质在不同物理、化学因子作用下稳定性不同的特点，用选择性沉淀法即可使杂蛋白变性沉淀，而欲分离的有效成分则存在于溶液中r