除了光引导原位合成技术外r
有的公司如美国I
r
cytePharmaceuticals等使用压电打印法Piezoelectricpri
ti
g进行原位合成r
其装置与普通的彩色喷墨打印机并无两样r
所用技术也是常规的固相合成方法r
做法是将墨盒中的墨汁分别用四种碱基合成试剂所替代r
支持物经过包被后r
通过计算机控制喷墨打印机将特定种类的试剂喷洒到预定的区域上r
冲洗、去保护、偶联等则同于一般的固相原位合成技术r
如此类推r
可以合成出长度为40到50个碱基的探针r
每步产率也较前述方法为高r
可达到99以上r
r
尽管如此r
通常原位合成方法仍然比较复杂r
除了在基因芯片研究方面享有盛誉的Affymetrix等公司使用该技术合成探针外r
其它中小型公司大多使用合成点样法r
r
后一方法在多聚物的设计方面与前者相似r
合成工作用传统的DNA或多肽固相合成仪完成r
只是合成后用特殊的自动化微量点样装置将其以比较高的密度涂布于硝酸纤维膜、尼龙膜或玻片上r
支持物应事先进行特定处理r
例如包被以带正电荷的多聚赖酸或氨基硅烷r
现在已有比较成型的点样装置出售r
如美国Biodot公司的点膜产品以及Cartesia
Tech
ologies公司的PixSysNQPA系列产品r
前者产生的点阵密度可以达到400cm2r
后者则可达到2500cm2r
r
２．样品的准备及杂交检测r
目前r
由于灵敏度所限r
多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程序的扩增r
不过也有不少人试图绕过这一问题r
如MosaicTech
ologies公司引入的固相PCR方法r
引物特异性强r
无交叉污染并且省去了液相处理的烦琐；Ly
xTherapeutics公司引入的大规模并行固相克隆法Massivelyparallelsolidphaseclo
i
gr
可在一个样品中同时对数以万计的DNA片段进行克隆r
且无需单独处理和分离每个克隆r
r
显色和分析测定方法主要为荧光法r
其重复性较好r
不足的是灵敏度仍较低r
目前正在发展的方法有质谱法、化学发光法、光导纤维法等r
以荧光法为例r
当前主要的检测手段是激光共聚焦显微扫描技术r
以便于对高密度探针阵列每个位点的荧光强度进行定量分析r
因为探针与样品完全正常配对时所产生的荧光信号强度是具有单个或两个错配碱基探针的535倍r
所以对荧光信号强度精确测定是实现检测特异性的基础r
但荧光法存在的问题是r
只要标记的样品结合到探针阵列上后就会发出阳性信号r
这种结合是否为正常配对r
或正常配对与错配兼而有之r
该方法本身并不能提供足够的信息进行分辨r
r
对于以核酸杂交为原理的检测技术r
荧光检测法的主要过程为：首先用荧光素标记扩增（也可以有其它放大技术）过的靶序列或样品r
然后与芯片上的大量探针r