空白孔，否则会出现吸光度值为负值的现象。
酶标仪的使用需强调仪器的维护和保养，酶标仪首先应放置通风处，避免机器内部尤其是滤光片发霉，在使用过程中避免酸等物质溢出腐蚀仪器，每半年或一年需厂商维护及计量局检定。比色前应先用洁净的吸水纸或布拭干板底附着的液体。为使检测结果稳定，酶标仪在使用前应先预热15～30分钟。5灰区的设置
通常情况下，ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果，两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”（cutoffvalue，CO值），这是定性免疫测定结果报告的依据。由于ELISACO值的设置不能区分所有正常和异常的人群，尤其是位于CO值附近的人群，并且ELISA检测具有以下几个特点：检测变异大（18～65）；不同试剂盒CO值存在差异；病毒感染存在窗口期；病毒变异后表达产物含量降低以及个体差异等，因此在CO值附近存在一个临床意义可疑的的区域被称之为“灰区”，在国内的传染性病原体抗原和抗体检测的ELISA试剂盒中均未涉及“灰区”的设置，仅仅依靠CO值来决定感染的有无，尤其是对献血员的筛查具有较大的风险，因此对于检测结果位于“灰区”的病人可采用确认实验或追踪检测的办法加以确诊。
目前“灰区”的设置有三种方式：⑴CO×（1±CV），CV为该试剂的批内CV一般在1520；⑵CO±2s，s为实验室做室内质控ROC（常规条件下的变异）的标准差；⑶根据实验数据。6标本复查
ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控品检测在控，也可因孔间差异造成结果的不同，因此加大复查是保证结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCVAb、HIVAb、TPAb等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。
复查方式主要有两种：一是采用同一种试剂复查，理由是市售试剂均通过国家食品药品监督管理局（SFDA）认可，严格按照其说明书操作，检测结果具有法律效应。另一种复查方
f式是采用国外进口试剂进行复查，其理由是尽管进口试剂并不是“金标准”，但实验室已经对此高度重视，并且使用了质量较好，价格较贵的试剂。7结果判断和报告常用下列几种方法表示结果：71定性测定1阳性判定值法cutoffvalue，CO：一般为阴性对照的平均A值加一个常数，试剂制备、检测过程必须严格标准化，要先计算出阳性对照A值平均数和阴性对照A值平均数。标本A值≥阳性判定值为阳性。阳性判定值公式中的常数是在特定的检测系统中通过对大量标本的实验检测而得到的。现以HIV检测试剂盒为例。NC阴性质控对照的A值；PC1抗HIV1阳性r