血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告
实验名称
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量
实验日期
实验地点xx实验室
合作者xxx
指导老师xxx
评分
教师签名
批改日期
一、实验目的
11学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法；
12了解电泳技术的一般原理；
13掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。
二、实验原理
21血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH74。它们在pH86的缓冲液
中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所
带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。
血清蛋白质
等电点
分子量
占总蛋白的％
清蛋白
464
69000
57～72
α1－球蛋白
506
200000
2～5
α2－球蛋白
506
300000
4～9
β－球蛋白
512
90000～150000
65～12
γ－球蛋白
685～73
156000～950000
12～20
缓冲液pH86，pI＜pH。
f血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。预测血清蛋白电泳区带图血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带
23①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。
三、材料与方法：
31实验材料：311实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥巴比妥钠缓冲液（pH86，离子强度006molL）；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：04molNaOH溶液。312实验器材：①V1100分光光度计（×1）；②恒温水浴箱（×1）；③试管（×6）、试管架（×1）；④1000μL加样枪（×1）、加样枪架（×1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm8cm，厚度120μm）；⑥培养皿（×5）；⑦点样器或载玻片（×1）；⑧平头镊子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩电泳槽（×1）；直流稳压电泳仪（×1）32实验步骤1．准备与点样：①取2×8cm的膜条；②亚光面距一端15cm处取一点样线；③充分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血清；⑥垂直点样。点样示意图：
f注意：点样线尽量点得细窄而均匀。

小组标记
8cm点样线m
样品标记
点样区
15cm
粗面）

2cm
2电泳：①放置膜条（点样面向下，点样端置于阴极）；②膜条贴紧滤纸，拉直膜条；③平衡五分钟；④通电（调节电压120v电流，时间：4560mi
）；③关闭电源。
电泳槽解剖图：
3染色、漂洗：①通电完毕；②取出膜条；③浸于染色液（氨基黑10B）中，5mi
；④取出膜条，浸于漂洗液；⑤反复漂洗2次，直至漂r