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亚群间的分界点,有利于流式细胞仪的分析和分选。
荧光信号的补偿:当用一种激光束同时激发两种染料发射出两种不同波长的荧光时,两种荧光发射光谱有一定的重迭,可用电补偿减去不适合荧光通道测定的重迭信号。
(4)数据贮存和计算机控制系统数据贮存采用列表排队ListMode方式。利用计算机用多种图形来表明各参数间的相互关系,以单参数直方图,双参数二维点图,等高图等方式显示。数据分析一般设定正确的分析范围,划分计算区域和计算结果。
f(5)细胞分选系统细胞分选可使被指定的细胞从细胞群体中分离出来。流式细胞仪所测定的任何参数都可以作为细胞分选依据,被选出来的细胞的均一性与所测参数有关。其工作原理是把液滴形成信号在压电晶体上使之产生机械振动(不太通顺),液柱断裂成一连串均匀的液滴,一部分液滴中包有细胞,如果其特性与被选定要进行分选的细胞特性相符,则带有特定的电荷。带有电荷的液滴向下落入偏转板的高压静电场时,偏转落入指定的收集器内,完成细胞分类收集的目的。2.流式细胞仪的类型流式细胞仪分为两大类,一类为临床分析型又名台式机,特点为仪器光路调节系统固定,自动化程度高,易学易掌握。如Becto
Dicki
so
简称BD公司的FACSCalibur、Beckma
Coulter公司的EPICSXL、Cytomatio
公司的MOFLO、Partec公司的Pas、Aber公司的Microcyte、Ortho公司Cytoro
等;另一类为科研分选型,特点为可快速将所感兴趣的细胞分选出来,并且将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上,同时可选配多种波长类型的激光器,适用于更广泛的科学研究之用。如BD公司的FACSVa
tage,Beckma
Coulter公司的EPICSALTRA,Cytomatio
公司的MOFLOMLS及Partec公司的PasIII等。最近BD公司推出了FACSAria其优点为具备科研分选型标准而操作与临床分析型同样简便,自动化程度高。3.流式细胞仪检测的质量控制(1)样品与试剂血液、骨髓、体液等必须当天采集,6h之内进行免疫荧光染色;活化血小板检测应在采血后立即染色与固定。组织样品可采用机械法去聚集并过滤,最好用单细胞制备仪(medimachi
e)处理。试剂、缓冲液、溶血剂、固定剂等必须符合标准。(2)对照设置目的是避免各种因素可能造成的假阳性或假阴性反应。①同型对照:与单克隆抗体(MoAb)相同的、未免疫小鼠标记荧光素的免疫球蛋白亚类作对照。主要考虑细胞的自发荧光、非特异性抗体结合等影响因素。②阳性对照:已知阳性标本能否确定为阳性。达不到要求时不能进行临床试验。③阴性对照:用已知不r
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