献给初学者：wester
blot操作步骤2012版2011年鄙人做wester
的时候，发现目前的资料都很老，网上的资料也大多互相传抄，说法各异，于是综合了目前网上所能找到的资料和个人实际经验，编辑了这份wester
blot操作步骤2012版，内容包括主要操作步骤和所需要注意的有用的细节，并附上参考文献（原谅我无法像E
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ote那样一一注明文献出处，只能大概标注出引用的参考资料），希望对大家有帮助。鄙人按下文的步骤操作已经做出来了稳定可重复的、背景干净的wester
条带了，所以相信你也行。为了节省时间，鄙人总结了一下wester
blotQuickGuide和一天做出wester
的具体时间规划，附在文末。初次发这么长的帖子，难免有错，欢迎批判指正。r
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背景：r
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蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学GeorgeStark。NealBur
ette于1981年所著的A
alyticalBiochemistry中首次被称为Wester
Blot。最开始做印迹的是一个叫Souther
的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Souther
blot，后来出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Norther
和Wester
，与这两个技术的发明人没有关系了。r
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一、蛋白质的样品制备：r
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由于这一步方法各异，具体步骤请参考试剂盒的说明书即可。蛋白质的样品制备是Wester
Blotti
g的第一步，样品制备是关键步骤，要求尽可能的获得所有蛋白质，应注意以下问题r
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gt在合适的盐浓度下，应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。r
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gt选择合适的表面活性剂和还原剂，破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键，使其形成一个各自多肽的溶液。尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子。r
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gt防止蛋白质在样品处理过程中的人为的修饰，制备过程应在低温下进行，以避免细胞破碎释放出的各种酶类的修饰（加入合适的蛋白酶抑制剂）。r
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gt样品建议分装成合适的量（比如分装出20ul检测蛋白质定量用），然后保存与20°或80℃中长期保存，但要注意不要反复冻融，因为会使蛋白的抗原特性发生改变。r
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gt若蛋白提取过程存在问题或蛋白发生降解则很难进行好之后的实验，也就很难做出好的结果了。除此之外loadi
gbuffer的作用也不容忽视，切莫使用不新鲜的上样缓冲液，同时在处理时也应注意将样品与loadi
gbuffer混合均匀。r
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二、蛋白质定量r
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如果要定量的话，一般选择BCA或者Bradford方法，BCA要求检测波长为562
m，Bradford为595
m。具体方法见各试剂盒说明书。为避免假阳性结果，建议先把lysisbuffer加入BCA工作液或考马G250混合看是否产生颜色r