1透明质酸菌种染色方法用吸管吸取菌液一滴滴在载玻片中央，加一滴藩红染色液染色三分钟，在酒精灯上固定干燥后，用洗瓶洗去染色液后，晾干，显微镜下观察。2斜面的制作（1）按斜面配方称取各种药品用纯水溶解后，调PH至70，加入琼脂，在电炉上加热至沸（沸腾三次）分装于试管（装液量约到试管高度的14处），塞上棉塞，用报纸包扎好灭菌。（2）0．1MPA，121℃，20mi
（3）灭菌完毕待压力自然下降至零，方可打开灭菌锅盖，严禁急速排气降压，以防培养基冲湿棉塞，灭菌后的斜面试管待冷却至45℃左右放置斜面，盖上无菌报纸，经无菌检查（空培养24h）后用报纸包扎好（报纸注明日期），放入冰箱备用。3种子的制作（1）培养基的制作，按种子培养基配方称取药品用纯水溶解后，调PH至70，装液量按500ml三角瓶150ml，2000ml三角瓶装1000ml分装于三角瓶中，瓶口用纱布包扎，用报纸包扎好灭菌，并注上日期及培养基类型。（2）在无菌条件下通过无菌操作将菌源接种于培养基中。（3）将接种好的三角瓶放入37℃转速150rmi
的摇床中培养1216h。4菌种的分离纯化（试管稀释法）（1）倒板：无菌操作条件下，将灭菌后冷却至6070℃的培养基倒入培养皿内，每皿约25ml，水平放置，凝固后备用。（2）吸取05ml菌悬液于无菌水管中做梯度稀释。（3）用无菌吸管吸取菌悬液两滴于培养皿中，每个稀释梯度23板，首末梯度可做1板。（4）用无菌刮刀将培养皿上的菌悬液由低浓度到高浓度涂布均匀。（5）于3637℃的培养箱中倒置培养12天，待刚有菌落长出，挑取单个菌落移接斜面，挑取透明圈大的菌落。（6）斜面放3637℃恒温培养箱中培养12天，成熟后供菌种筛选。5划线分离的操作方法（1）取无菌平板一套在火焰旁按无菌操作法倒入20ml营养琼脂让其冷凝成平板。（2）左手拿上述平板右手拿接种环在火焰上灭菌后沾取原始分离物在平板上平行划线三条（3）将接种环在火焰上灭菌左手平板转动大约70度用灭菌接种环通过第一次划线的地方作二次划线亦划三条。（4）同上法再作第三次第四次划线。（5）盖上平板盖将平板倒过来置37℃下培养12天后观察结果划的好应在第四次划线处出现单个菌落。6菌种的传代操作（1）在火焰旁将原有的菌种斜面与待接种的新鲜斜面持在左手拇指、食指及中指之间，菌种管在前，接种管在后。（2）以右手在火焰旁转动两管的棉塞，再以右手持接种环的柄端将接种环在火焰上灼烧，使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间在火焰旁分别拔r