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100=83血球计数板的使用16×25型的计数板将计数室放大,可见它含16中格,一般取四角:1、4、13、16四个中方格(100个小方格)计数(见图二)。将每一中格放大,可见25个小格。计数重复3次,取其平均值。计数完毕后,依下列公式计算:酵母细胞个数/1mL100个小方格细胞总数100×400×10000×稀释倍数或:4个中格的细胞数4×16×10000×稀释倍数
有一种计数板的结构为25×16,计算如下:4个中格的细胞数4×25×10000×稀释倍数
(二)细胞生长曲线(细胞贴壁率、细胞分裂率:略)
概念:细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮然后贴壁,随后度过长短不同的潜伏期,即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入平顶期,然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化,典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期,斜率较大的指数生长期,呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部
f分。以存活细胞数万/mL对培养时间h或d作图,即得生长曲线。方法:计数法:1.取生长良好接近汇合的细胞,用胰酶消化,用新培养基制成细胞悬液后计数见四、细胞传代培养的实验步骤。如是非粘壁细胞,则离心弃旧培养基后,换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。2.根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104/mL作传代培养接种细胞,共接种21瓶细胞。3.24h后开始计数细胞,以后每隔24h计数一次,每次取3瓶细胞,分别进行计数。计算平均值。连续计数7d。4.根据细胞计数结果,以单位细胞数细胞数/mL为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线。MTT法:1.制备1mL细胞悬液。空白对照以1mL培养基代替细胞悬液。加入0.1mLMTT于37℃孵育4h。使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。2.加1mLDTW脱色液,37℃至少静置30mi
甚至过液,使甲质颗粒充分溶解。3.吸取200μL该溶解液至96孔板孔中,在酶标仪上读取OD值,检测波长570
m,参考波长630
m。4.每隔24h测量一个点,每个点为3个平行样品的平均值。CCK8法:略CCK8法的优点:1、使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂;2、CCK8法能快速检测;3、CK8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度;4、CCK8法的重复性优于MTT法;5、CCK8法对细胞毒性小;6、CCK8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。
CCK8法的缺点1、与MTT法相比,CCK8和XTT的价r
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