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格比较贵。2、CCK8试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生漏加或多加。(三)活选细胞观察:相差倒置显微镜使用:略附件二:细胞裂解液:提取RNA用
05SDS01mmolLEDTAPH8010mmolLTrisclPH8020ugmlRNaseTERNA、DNA溶解用
1mmolLEDTAPH8010mmolLTrisclPH80附件三IC50半抑制率实验:MTT法:MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项:MTT全称为345Dimethylthiazol2yl25diphe
yltetrazoliumbromide,汉语化学名为34,5二甲基噻唑22,5二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formaza
)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490
m波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损
f害。MTT溶液的配制方法
通常,此法中的MTT浓度为5mgml。因此,可以称取MTT05克,溶于100ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用022μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT吸光度最好在007范围内。
MTT一般最好现用现配,过滤后4ordmC避光保存两周内有效,或配制成5mgml保存在20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性,用的时候小心有条件最好带那种透明的簿膜手套配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉配制MTT时用用PBS溶解也有人用生理盐水配,60℃水r
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