氮中保存或80°冰箱保存。
附件一、培养细胞的生长状况观察
（一）细胞计数操作规程胎盘蓝法原理：（产品批号：T8154，T6146和Z35962－9）使用胎盘蓝染色决定血细胞总数和活细胞数目，胎盘蓝是用于染色的多种染料中能被活细胞排斥的一种染料，这种方法的成立是基于活细胞不能被染色：胎盘蓝对血清蛋白比细胞蛋白有一种更强的亲和力，如果背景太深，在计数之前细胞应成球状并重悬在无蛋白的培养基或盐液中。方法：1、预先在平衡盐液中悬浮细胞（例如：Ha
k’s平稳盐液HBSS，产品批号：H2513）2、取05ml04胎盘蓝于一试管中，加03ml（HBSS和02ml细胞悬液（稀释倍数＝5）并且混匀，允许放置5－15分钟。注意：如果细胞在胎盘蓝中暴露时间过长，活细胞也会像死细胞一样被染上色。3、在血细胞计数板上盖上盖玻片，使用巴斯德毛细吸管或其它合适的器材取少量的胎盘蓝细胞悬液于血细胞计数板上的两个小室中。将巴斯德毛细吸管小心的靠在盖玻片边缘，利用毛细张力充满小室，不要过度或过少充盈。1）从血细胞计数板的一个小室开始，计数中间和四角边长mm的正方形中的所有细胞数（详见sigmaP1845的图样I）死细胞被染成蓝色，分别计数活细胞和死细胞数。注意：压线细胞的计数原则，数上不数下，数左不数右（详见sigmaP1845的图II）2）重复上述步骤计数第2个小室
f注意：如果超过10的细胞成串，应重复全部程序通过吹打务必使细胞在原液中和在胎盘蓝细胞悬液中一样分散，如果在10个正方形方格中细胞数少于200个或多于500个（20－50个细胞正方形）应重复这个步骤，以调节细胞稀释倍数。3）准备第二份样品并重新计数以保证准确4）细胞计数－血细胞计数板上盖好盖玻片的每个正方形（指中央大方格，其长度宽度均为1mm的正方形，与盖玻片的距离为01mm），总体积为01mm3或104cm3。若1cm3近仍等于1ml，那么每毫升中集中的细胞数（和细胞总数）则可以这样来计算。每毫升细胞数＝每个正方形的平均细胞数稀释倍数104（10个正方形的细胞计数）例：如果每个正方形的平均细胞数是455104＝225106个细胞ml总细胞数＝每毫升细胞数最初的细胞样品的体积例：225106个细胞ml10ml（最初体积）＝225107个细胞（总细胞）5）活细胞比例（）＝总的活细胞数（没染上色的）总的细胞（染上色的和没染上色的）100例：如果每个正方形中没染上色的（活的）细胞平均数是375，总活细胞数＝3755104活细胞数ml10ml（最初体积）＝1875107个活细胞，活细胞比率（）＝1875107（活细胞数）225107总细胞数r