品Marker样品1样品样品样品样品样品样品样品样品
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体积10μl
20μl
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f4电泳：浓缩胶80V，约20分钟，分离胶100V，约1小时。
一、考马斯亮蓝染色注：将提取的植物蛋白进行电泳，电泳后进行考马斯亮蓝染色。全细胞裂解液电泳后，进行wester
blot检测。
1将电泳后的PAGE胶取出放入容器中，加入适量蒸馏水（以充分覆盖PAGE胶为宜），加热至沸腾后5分钟，弃去蒸馏水；
2加入适量考马斯亮蓝染色液（液面覆盖凝胶即可）加热至沸腾后5分钟，弃染色液；3加入适量蒸馏水，加热至沸腾后5分钟，弃蒸馏水，重复此步骤至背景清晰。4观察拍照。
Wester
Blot溶液配制：配制500ml1×TBST溶液：
50mlTBST（ph8310×）450ml蒸馏水配制100ml5牛奶封闭液：4度保存
5克脱脂奶粉100ml1×TBST配制100ml转膜缓冲液（甲醇）：CW0044TrisGlyci
e（ph8310×）
10mlTrisGlyci
e20ml甲醇70ml蒸馏水（4度保存）
一．转膜及染色实验材料：NC膜、滤纸、转膜缓冲液、丽春红染色试剂、水平摇床实验仪器、耗材：转膜仪实验步骤：1电泳完成后，小心打开玻璃板，去除浓缩胶，将分离胶剥离后，放入转膜缓冲液中平衡。2用剪刀剪相同大小的NC膜及滤纸，放入转膜缓冲液中平衡。3转膜：（半干转）
1）将平衡好的3层滤纸平铺于转膜槽底部。滴加转膜液润湿。2）将胶平铺在滤纸上，赶平去气泡。3）将平衡好的NC膜平铺在胶上，用玻璃棒赶平，确保膜与胶之间没有气泡。4）再将3层滤纸平铺于膜上，赶平。5）盖好转膜槽上盖，压紧。插上电极，50mA膜，转膜1小时。
f转膜：（湿转）150mA膜，转膜15小时4丽春红染色1）将转移后的膜完全浸入丽春红染色液中，摇动35分钟。2）蒸馏水漂洗膜23次，直至膜上出现清晰条带。3）再次用蒸馏水漂洗，去除染料。
二．封闭实验材料：5脱脂奶封闭液实验步骤：用封闭液将膜室温封闭1小时
三．抗体检测：检测βacti
，分子量43KDa实验材料：5脱脂奶封闭液、抗βacti
鼠单克隆抗体、山羊抗鼠IgG（HL）HRP、TBST实验步骤：1在6ml5的脱脂奶中加入2μl抗βacti
鼠单克隆抗体（稀释度为13000）。2将膜浸入到一抗稀释液中，室温孵育1小时，或者4℃孵育过夜。3TBST漂洗7次，每次5分钟。4在10ml5的脱脂奶中加入2μl山羊抗鼠IgG（HL）HRP（稀释度为15000）。5将膜浸入到二抗稀释液中，室温孵育1小时。6TBST漂洗7次，每次5分钟。
四．显影实验材料：DAB显色液实验步骤：1将试剂Ar