蛋白电泳（制胶、SDSPAGE电泳）
实验材料：
SDSPAGE凝胶制备试剂盒、电泳缓冲液、提取的蛋白或全细胞裂解液、广谱彩虹预
染中分子量蛋白Marker、SDSPAGELoadi
gBuffer（还原，5×）、G250蛋白快速染色试
剂、若干蒸馏水
实验仪器、耗材：
蛋白电泳仪、制胶仪、水平摇床、15ml离心管、5ml移液器、微量移液器、15ml离心管、
塑料饭盒（可在微波炉里加热使用）
配制溶液：
配制10APS溶液：20度保存
05gAPS5ml蒸馏水、25gAPS25ml蒸馏水
配制200ml电泳缓冲液：CW0045TrisGlyci
eSDS（ph8310×）
20mlTrisGlyci
eSDS180ml蒸馏水
配制1mlloadi
gbuffer：
200ul5×loadi
gbuffer800ul蒸馏水
实验步骤：
一．制胶：
1参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2根据分离蛋白的大小配制分离胶和浓缩胶。
SDSPAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
SDSPAGE分离胶浓度最佳分离范围
6胶
50150kD
8胶
3090kD
10胶
2080kD
12胶
1260kD
15胶
1040kD
3配制10分离胶：
将不同体积的30AcrBis291、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。
加入10APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
配制SDSPAGE分离胶
分离胶浓度
凝胶体积
双蒸水
所需各组分体积（单位：ml）
30AcrBis291
分离胶缓冲液（4×）
10APS
TEMED
f5ml208
167
125
005
0002
10ml417
333
10
15ml625
50
25375
01
0004
015
0006
20ml83
67
5
02
0008
4待胶灌至距离玻璃板顶端15cm的时候停止灌胶，加入蒸馏水水封。静置40分钟至1小时。
5待分离胶凝固后（水层胶层中间出现折线），倒掉蒸馏水，用滤纸将水溶液吸干。
6配制5浓缩胶：
配制5SDSPAGE浓缩胶
凝胶体积
双蒸水
所需各组分体积（单位：ml）
30AcrBis浓缩胶缓冲液10AP
291
（4×）
S
TEMED
2ml114
034
05
0020002
4ml228
068
1
0040004
6ml342
102
15
0060006
8ml456
136
20
0080008
7将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。注意：灌胶速度要快，防止凝胶。
8将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。静置20分钟，等待浓缩胶聚合。9待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。赶走气泡。
二．SDSPAGE电泳
1在电泳槽的内外槽灌至电泳缓冲液。
2制备样品：
1）蛋白样品：
根据植物蛋白或动物组织蛋白定量结果，计算蛋白提取液加入量，制备上样溶液。
蛋白提取液5×上样缓冲液蒸馏水，上样量为4060ug。
制备的样品，煮沸5分钟，12000rpm离心5分钟，取上清，上样。
3上样：蛋白上样顺序如下：
泳道1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
样r