实验方案设计
1仪器设备:
超净工作台超声波清洗器漩涡振荡器CP224S电子秤量仪隔水式恒温箱QCYAB102001手提式压力蒸汽灭菌锅电冰箱蒸汽消毒器PH计PH_3C培养皿试管牛津杯,电炉等试管三角烧瓶烧杯量筒玻璃棒培养基分装器扭力天平牛角匙高压蒸汽灭菌锅pH试纸(pH5.59.0)棉花牛皮纸记号笔麻绳纱布等。
2实验方案
31培养基的制备MRS培养基液体培养基:蛋白胨10g牛肉膏10g酵母膏5g柠檬酸二铵2g乙酸钠5g磷酸氢二钾2g硫酸镁7H2O058g硫酸锰025g吐温801ml蒸馏水1000mlPH6264琼脂18g葡萄糖20gLB培养基:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10gl32试验方法321乳酸菌发酵上清液的制备将活化好的菌株以2的接种量接种于MRS培养基中37℃下培养24小时后离心(4℃6000rmi
15mi
)取发酵上清通过直径为022纳米的威龙滤菌器过滤取过滤后的上清液置于4℃的冰箱中保存并使用322指示菌悬浊液的制备将活化后的指示菌培养液接种于LB培养基的试管中培养24小时后得到菌悬液待用先配置100ml生理盐水,加入250ml三角瓶中,再在其中加入20粒左右玻璃珠,高压灭菌,然后用接种环将斜面上的菌苔刮下,接入三角瓶中,一般接12环接可,或者用少量的无菌生理盐水倒入斜面中,用接种环将菌苔刮下,然后倒入三角瓶中,将三角瓶震摇1分钟左右,即可生成菌悬液。323抑菌物质的理化特性(1)不同热处理对菌株所产抑菌物质抑菌活性的影响分别在不同的温度(45℃60℃80℃100℃)下将菌株发酵上清液处理10mi
大肠杆菌为指示菌进行抑菌试验未经处理的发酵液作对照1倒平板:将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化,倒在培养皿内,每皿15ml(下层),待其凝固。此外,将融化的LB培养基冷却到50℃左右混入试验菌,将混有菌的培养基5ml加到已凝固的培养基上待凝固(上层)。
f2
摆放牛津杯:以无菌操作在培养基表面直接垂直放上牛津杯(内径6mm、外径8mm、高10mm的圆形小管,管的两端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),轻轻加压,使其与培养基接触无空隙。
3
温度处理分别在不同的温度(45℃60℃80℃100℃)下将菌株发酵上
清液处理10mi
)。
4加入待捡药业:在杯中加入待检样品(发酵液),牛津杯一般可以装240微升勿使其外溢。56培养:加满后置37℃培养1618小时。结果报告:观察结果,抑菌圈用尺直接量就可以。
不同pH值对菌株产抑菌物质抑菌活性的影响1
分别用1mol/LHCI和2mol/LNaOH将菌株发酵上清液调至不同的r