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HPLC色谱柱的维护与再生及色谱峰异常情况分析与处理方法
引言高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法。了解一些高效液相色谱的基础知识有助于对化工分析检测工作的认识和理解。本文简单介绍了高压液相色谱的基本概念和一些经典理论。一、基本概念和术语11色谱图和峰参数
色谱图chromatogram样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号时间曲线,又称色谱流出曲线elutio
profile。
基线baseli
e经流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。
噪音
oise基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移drift基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰peak组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线(高斯Gauss曲线)。不对称色谱峰有两种:前延峰leadi
gpeak和拖尾峰taili
gpeak。前者少见。
拖尾因子taili
gfactor,T,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子symmetryfactor或不对称因子asymmetryfactor。《中国药典》规定T应为095105。T<095为前延峰,T>105为拖尾峰。
峰底基线上峰的起点至终点的距离。
峰高peakheight,h峰的最高点至峰底的距离。
峰宽(peakwidth,W峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ
半峰宽(peakwidthathalfheight,Wh2峰高一半处的峰宽。Wh2=2355σ
标准偏差(sta
darddeviatio
,σ正态分布曲线x=±1时(拐点)的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小,分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。
峰面积peakarea,A峰与峰底所包围的面积。
f12定性参数(保留值)
死时间deadtime,t0不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
死体积deadvolume,V0由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分:进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙(被流动相占据,Vm)、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程,其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展,这3部分体积应尽量减小。V0=F×t0(F为流速)
保留时间rete
tio
time,tR从进样开始到某个组分在柱r
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