后出现浓度极大值的时间。
保留体积rete
tio
volume,VR从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR=F×tR
调整保留时间adjustedrete
tio
time,tR扣除死时间后的保留时间。也称折合保留时间reducedrete
tio
time。在实验条件(温度、固定相等)一定时,tR只决定于组分的性质,因此,tR(或tR)可用于定性。tR=tR-t0
调整保留体积adjustedrete
tio
volume,VR扣除死体积后的保留体积。
13柱效参数
理论塔板数theoreticalplate
umber,N用于定量表示色谱柱的分离效率(简称柱效)。
N取决于固定相的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。在一张多组分色谱图上,如果各组分含量相当,则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽,峰高则逐渐降低。
用半峰宽计算理论塔数比用峰宽计算更为方便和常用,因为半峰宽更易准确测定,尤其是对稍有拖尾的峰。
N与柱长成正比,柱越长,N越大。用N表示柱效时应注明柱长,如果未注明,则表示柱长为1米时的理论塔板数。(一般HPLC柱的N在1000以上。)
若用调整保留时间tR计算理论塔板数,所得值称为有效理论塔板数N有效或Neff。
理论塔板高度theoreticalplateheight,H每单位柱长的方差。实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算。14相平衡参数分配系数distributio
coefficie
t,K在一定温度下,化合物在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中的浓度之比。
f分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关,也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中,K有不同的概念:吸附色谱法为吸附系数,离子交换色谱法为选择性系数或称交换系数,凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。
在条件流动相、固定相、温度和压力等一定,样品浓度很低时Cs、Cm很小时,K只取决于组分的性质,而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件,在这种条件下,得到的色谱峰为正常峰;在许多情况下,随着浓度的增大,K减小,这时色谱峰为拖尾峰;而有时随着溶质浓度增大,K也增大,这时色谱峰为前延峰。因此,只有尽可能减少进样量,使组分在柱内浓度降低,K恒定时,才能获得正常峰。
在同一色谱条件下,样品中K值大的组分在固定相中滞留时间长,后流出色谱柱;K值小的组分则滞留时间短,先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大,越容易分离,因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。
在HPLC中,固定相确定后,K主要r