的10；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每510×106个细胞加1mlTrizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中在室温1530℃下放置5分钟；然后以每1mlTrizol液加入02ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；3取上层水相（离心后，混合物将分离为底层为浅红的中层为酚氯仿相上层为无色的水相。RNA包含在水相中，水相的体积约相当于所加的Trizol试剂量的60）于一新的离心管，按每1mlTrizol液加05ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温（15℃～30℃）放置10分钟，12000g（2℃～8℃）离心10分钟。【如果希望分离DNA或蛋白质，保留中层和下层酚氯仿相，有机相能保存在4°C一夜】
4弃去上清液（RNA沉淀为一层如凝胶样透明的小块附在管底和管壁），按每1mlTrizol液加入至少1ml的比例加入75乙醇进行洗涤，涡旋混匀，4℃下7500g离心5分钟【RNA能够在20°C保存在75乙醇中至少1年，4°C保存至少1周】
5小心弃去上清液，让沉淀的RNA在室温下自然干燥或真空干燥510分钟，注意不要干燥过分，否则会使RNA失去溶解性，导致A260280ratio16。
6加适量R
asefreewater溶解RNA沉淀，用枪头反复吸取混匀，5560℃水浴1015mi
。进行下游实验或70℃保存备用。
7RNA可进行mRNA分离，或贮存于70乙醇并保存于70℃。
预计的总RNA产量：
f注意1整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。另外，提取上清这步一定要小心，靠近沉淀的部分一定要舍得不要，要不然会有蛋白质污染，影响比值2加氯仿前的匀浆液可在70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70乙醇中可在4℃保存一周，20℃保存一年。总mRNA的提取自己的经验
一、关于TrizolReage
t需要的试剂1Chloroform：氯仿分析纯2Isoproplylalcohol：异丙醇分析纯375Etha
ol（i
DEPCtreatedwater）75乙醇。要求用分析纯无水乙醇并用001的DEPC处理过的无R
ase的水稀释。4RNasefreewater：无R
ase的水。方法是：将DEPC按001（VV）加在dH2O中500ml（50ul），在37℃过夜，并高压灭菌即得（150℃3小时）5一次性塑料手套6注意：DEPC有致癌之嫌7抽提出的细胞总RNA干燥后加水50ul，取10ul加无R
ase水990ul，稀释100倍成1ml。于05cm厚的石英比色杯中，以无R
ase水为对照，在721型紫外分光光度计下检测，结果应为：A260280ratio16。8分离组织10mg（纯组织）加800ulTrizol试剂。二、DEPC处理方法如下1DEPC处理（1）DEPCr