加终止液后10分钟内测量OD值
四、学生洗板并加酶标二抗（9：20－9：35，15分钟）五、温箱孵育（9：35－10：35，60分钟）免疫标记技术是在抗体球蛋白分子上，连接某一个特定的、容易检测的分子或原子标记物，利用标记抗体能与相应抗原结合的特性，通过标记物的检测，从而确定抗原的存在部位。标记抗体技术目前广泛应用的主要有荧光抗体、酶标记抗体和同位素标记抗体等。此外尚有铁蛋白标记抗体，主要用于免疫电镜的技术，在亚细胞水平上进行抗原定位。包括放射性核素标记技术、免疫荧光技术、免疫酶技术。1免疫荧光技术即免疫荧光细胞组织化学技术，是根据抗原抗体反应的原理，采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的。分为直接法、间接法、补体法、双重免疫荧光染色。A直接法：这是最早的方法。其基本原理是用已知的抗体标记上荧光素后成为特异性荧光抗体，染色时将该抗体直接滴在载玻片上进行孵育，使之直接与载玻片上的抗原结合，在荧光显微镜下直接观察，作出判断。该方法评价：简单易行、特异性高、快速方便，常用于肾活检组织几种免疫球蛋白的检测和病原体的检测。但其不足是只能检测相应的一种物质，敏感性较差，效果有时不理想，目前较少作为更多方面的检测。B间接法：该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接荧光抗体，与前面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗原。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。目前本法应用较广泛，只需制备一种种属荧光抗体，即可适用于多种第一抗体的标记显示。C补体法：是间接法的改良。它是采用特异性抗体同新鲜补体混合后再与切片上的抗原反应，补体就结合在抗原抗体复合物上，再用抗补体的荧光抗体与补体结合，形成抗原抗体补体抗补体荧光抗体复合物。这种方法不仅具有间接法的敏感性，而且荧光抗体不受免疫血清的动物种属限制，一种荧光抗体就能检测所有的抗原抗体系统；缺点是较间接法更容易出现非特异性染色，且补体不稳定，每次均要采取新鲜血清，操作上比较麻r