GST融合蛋白纯化方法
1目的片段接入pGEX载体；2涂板，挑单克隆，摇菌至OD600≈10，加入IPTG（终浓度1mM）诱导6－8h；3收菌，每升菌液约以50mLPBS重悬，加入1Trito
X100（vv），1％β巯基乙醇（vv），PMSF（终浓度1mM）；
以下步骤均在冰上操作：
4超声破碎菌体，15000g，10mi
离心取上清，在上清中加入适量GSTbeads，轻轻晃动令其吸附蛋白1h；
52000g，3mi
离心弃上清；6加入至少10倍体积PBS，轻摇至beads悬浮于溶液中，2000g，3mi
离心弃上清；7重复步骤6两次；8加入1mLGSTElutio
Buffer，轻摇10mi
；92000g，3mi
离心，收集上清；10重复步骤89至少两次；11SDSPAGE电泳检测蛋白纯度，Bradford法检测蛋白浓度；12将蛋白置于20℃保存。
PS大量提取前应取少量菌液，改变IPTG浓度，诱导温度，诱导时间等，以确定蛋白表达的最适条件。
f制备细胞裂解物：
1每100ml培养物的细胞沉淀悬于4mlPBS2加入溶菌酶至终浓度1mgml，冰上放置30mi
3用针筒将10ml02Trito
X100强行注入细胞裂解物中，剧烈震动数次混匀；4加入DNase和RNase至终浓度5ugml4℃震动温育10mi
54℃3000g5000rmi
离心30mi
6上清转移到一只新试管，加入DTT至终浓度为1mmolL
纯化融合蛋白：
7细胞裂解物与50谷胱甘肽琼脂糖树脂匀浆混合，每100ml细胞培养物加2ml树脂，于室温下轻摇30mi
8混合物于4℃以500g2100rmi
离心5mi
小心去掉上清并留样少许进行SDSPAGE9沉淀中加入10倍标准体积的PBS颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白；104℃以500g2100rmi
离心5mi
小心去掉上清并留样少许进行SDSPAGE11重复步骤9和10两次；12结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱缓冲液洗脱，也可用凝血酶，肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白；用谷胱甘肽洗脱洗脱融合蛋白：
a沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10mi
洗脱树脂上结合的蛋白；
b4℃以500g2100rmi
离心5mi
上清移至新管中c重复步骤a和b两次，合并3次的上清；蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶细胞：a在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶，肠激酶或Xa因子。每毫升树脂加入50单位荣誉1mlPBS的蛋白酶，颠倒离心管数次混匀，室温下震荡2～16h用小规模实验确定精确时间；b4℃以500g2100rmi
离心5mi
上清小心移至新管中1310SDSPAGE分析每一步（细胞抽提，洗涤和洗脱）样品的蛋白质组成。
谷胱甘肽琼脂糖树脂的处理：
1轻轻颠倒盛有谷胱甘肽琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆；2取部分匀浆放入15ml聚丙烯管（每100ml细菌培r