心法检测试剂盒说明书72HIV抗体ELISA检测记录表
起草人：唐立红、吴润强审核人：陈洁晶
批准日期：2010年9月9日生效日期：2010年9月9日
中国人民解放军第一八一医院
f中国人民解放军第一八一医院HIV初筛实验室质量手册
HIV初筛实验室标准操作程序
版号：第四版
页号总页数：颁布日期：
1049
2010年9月
万泰ELlSA（夹心法）试剂
编号：HIVSOP004
1设备和材料（详见附件）11北京万泰生物药业股份有限公司
人类免疫缺陷病毒抗体双抗原夹心酶联免疫法检测原理：本试剂盒应用双抗原夹心酶联免疫法原理ELISA检测血清或血浆样品中人类免疫缺陷病毒HIV（12型）抗体，预包被高度基因重组HIV（12型）抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，加入HRP标记HIV（12型）抗原，然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度（A值）从而判定样品中HIV抗体的存在与否。适应范围：人类免疫缺陷病毒（型）抗体辅助检查及献血员筛查。
2工作流程：21用去离子水或蒸馏水20倍稀释浓缩洗涤液。22将所需数量的条板固定于支架，按顺序编号，设置样品孔、空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔（每次试验必须设空白对照1孔，阳性对照2孔，阴性对照3孔）。在样品孔中加100μl测样品，空白孔不加任何液体，阴性阳性对照孔分别加入100μl阳性对照血清，轻拍混匀。23置37℃水浴温育30分钟。24将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍，扣干，注：洗涤时各孔要加满洗液，勿使孔间交叉污染。采用洗板机时应设定每遍有40秒的浸泡时间。25每孔加入100μl酶标记物空白孔除外，轻拍混匀。26置37℃水浴温育30分钟。27将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍，扣干，注：洗涤时各孔要加满洗液，勿使孔间交叉污染。采用洗板机时应设定每遍有40秒的浸泡时间。28每孔加显色剂A50μl和显色剂B50μl，轻拍混匀置37℃避光温育15分钟。29每孔加入终止液50μl终止显色反应。210用酶标仪单波长450
m（需设空白对照并以空白对照孔调零或双波长450630
m测定各孔A值。211完成实验2111未用完的试剂盒放回冰箱。2112关闭酶标仪和洗板机。2113处理各种废物，清洁和消毒工作区。2114保存标本：阳性或可疑阳性的标本要离心吸取血清，并分装数管冻存，以备复检或送检。
3结果判定：31临界值（cutoff）012阴性对照的A值
起草人：唐立红、吴润强审核人：陈洁晶
批准日期：2010年9月9日生效日期：2010年9月9日
中国人民解放军第一八一医院
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