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小:0725cm耐受压:03mPa最大流速:4mlmi
建议流速:1mlmi
【protei
G】G组链球菌的表面蛋白,属于III型Fc受体,能以非免疫机制的方式结合IgGFc区域。protei
G和IgG在pH70时有很强的结合能力,而其结合产物的洗脱一般在pH253是进行。由于IgG对段敏感,会破坏其生物学活性,故一般在收集管种种加入60200μl的1MTrisHCl(pH90),一般用100μlml洗脱液,这样纯化的IgG最终会中和成中性。注意:经pH洗脱后在收集管内欲置中和液或速加中和液对保持纯化抗体的活性至关重要。
小鼠IgG单克隆抗体溶液在280
m时。144(吸光单位)相当于1mgml。【缓冲液准备】1、结合缓冲液:20mMsodiumphosphate。pH70定容至1000ml
称取76024gNa3PO42H2O(MW38012),定容置1000ml,调pH至702、洗脱缓冲液:01MGlyci
eHCl,pH271000ml
称取7507gGlyci
e(MW7507),定容至1000ml,调pH至27【样品准备】样品最好用结合缓冲液稀释,上柱前样品过滤(022μm滤膜)或离心。【操作步骤】1、在收集管中加入100μl的1MTrisHCl(pH90),用于收集1ml的洗脱液。2、将注射器或泵管充满结合缓冲液。移去柱子上接口的塞子,用适配的接头子将其连接到注射器或者泵管,一“滴对滴“的方式充满柱子后方可以连接,避免空气进入主子。3、移去柱子下接口的塞子,扭断即可。4、用10ml(10个柱床体积)结合缓冲液洗柱子,流速为1mlmi
5、上样:用2ml上样环上样。6、用510ml(510个柱床体积)结合缓冲液冲洗柱子,直到流出液中没有杂物质。7、用25ml(510个柱床体积)洗脱液进行洗脱。8、纯化产物可以利用HiTrapDesalti
g或PD10柱交换缓冲液。9、纯化结束后,用20乙醇保存柱子,防止微生物的生长。
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