与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5％胎牛血清（BSA）和1％聚乙二醇（分子量20KD）。加入的量：5％BSA使溶液终浓度为1；1聚乙二醇加至总溶液的110。
在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的，在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量最大。
下述标记步骤最为常见：
①用01molLK2CO3或01molLHCl调节金溶胶至所需pH标记SPA时调到pH60。
②于100ml金溶胶中加入最佳标记量的蛋白质溶液（体积为2～3ml），搅拌2～3分钟。③加入5ml1PEG20000溶液。④于10000～100000g离心30～60分钟（根据粒径大小选择不同离心条件），小心吸去上清液（切忌倾倒）。⑤将沉淀悬浮于一定体积含02～05mgmlPEG20000的缓冲液中，离心沉淀后，再用同一缓冲液恢复，浓度以A1cm540
m15左右为宜，以05mgml叠氮钠防腐，置4℃保存。
f⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG200柱进行凝胶层析分离纯化，以含01BSA的缓冲溶液洗脱。通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为82，以A蛋白包被的金溶胶洗脱液为pH70。
以上操作中应注意，一切溶液中不应含杂质微粒，可用高速离心或微孔滤膜预处理。（4）胶体金标记蛋白的纯化1）超速离心法：根据胶体金颗粒的大小，标记蛋白的种类及稳定剂的不同选用不同的离心速度和离心时间。用BSA做稳定剂的胶体金羊抗兔IgG结合物可先低速离心（20
m金胶粒用1200rmi
，5
m金胶粒用1800rmi
）20mi
，弃去凝聚的沉淀。然后将5
m胶体金结合物用6000g，4℃离心1h；
20
m～40
m胶体金结合物，14000g，4℃离心1h。仔细吸出上清，沉淀物用含1BSA
的PB液（含002NaN3），将沉淀重悬为原体积的110，4℃保存。如在结合物内加50甘油可贮存于18℃保存一年以上。
为了得到颗粒均一的免疫金试剂，可将上述初步纯化的结合物再进一步用10～30蔗糖或甘油进行密度梯度离心分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。
2）凝胶过滤法：此法只适用于以BSA作稳定剂的胶体金蛋白结合物的纯化。将胶体金蛋白结合物装入透析袋，在硅胶中脱水浓缩至原体积的15～110。再经1500rmi
离心20mi
。取上清加至SephacrylS400（丙烯葡聚糖凝胶S400）层析柱分别纯化。层析柱为08cm×20cm，加样量为床体积的110，以002MolLPBS液洗脱（内含01BSA，005NaN3，pH82者用IgG标记物），流速为8mlh。按红色深浅分管收集洗脱液。一般先滤出的液体为微黄色，有时略混浊，内含大颗粒聚合物等杂质。继之为纯化的胶体金蛋白结合物，随浓度的增加而红色逐渐加深，清亮透明，最后洗脱出略带黄色的为标记r