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f成借助溶剂梯度，或者恒定流动相组成结合一个温度梯度），并且，当如以上描
述，对于代谢组学分析所有方法使用的例子已经被阐述。使用提高UPLC柱温或者确实任何包裹柱子的LC分离，产生一个变化在Va
DeemterPlot中，改变最佳分离位置实现一个更高流速，尤其否认任何压力下降的优点，但是此方法被描述通过提高流速伴随着温度梯度以致于达到压力的要求。使用高柱温增加质谱发
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f射效率，并不是线性增加对于所有分子，通过不能同分析物在柱子中迁移，可能导致灵敏度改变，如果需要的话提供其他方面的最佳选择条件。对于尿液中代谢轮廓使用HTUPLCMS恒定柱温，第一次在2005年阐明。在这个例子中，柱温为90℃，流速为900μLmi
和操作压力为800bar导致峰更大空间分离比700bar溶剂线性梯度的条件下仅在10mi
。确实，随着分析时间变长50mi
，峰的分离空间容量大于1000也是可能的（如图4）在另一个例子，此时使用溶剂组成恒定（酸化溶液），温度梯度为50180℃，用于家族Zucker鼠尿液中显型的研究（二型糖尿病模型），然而，使用HTUPLC分析血浆的方法是不成功的，并且它是清楚的洗脱非极性代谢产物，例如脂类，依然要求使用包含流动相的有机试剂，虽然可能在较低浓度下比在低温条件下使用。提高UPLC温度因此可以提供一些有实际价值和经济利益，但仔细选择柱子的学科知识被要求掌握。当并不是所有的柱子都有足够稳定性。根据以上两种方法的要点，恒定温度的模式更易于应用，当许多UHPLC仪器配置一个恒温箱。温差梯度与之同时可能更加用途广泛，更加困难的按规章使用（尤其当联合恒定压力通过变化流速来实现效率最大化）和可能要求调查研究在一个更加复杂的柱温箱。一个明显的担忧就是热不稳定化合物和研究者必须清楚的评估对于分解的各个不稳定分析物的潜能在应用于HTs时。
33极性代谢物分析LCMS正如所讨论的，RPLC限制分离极性分析物，并且，为了实现这样化合物代谢轮廓，其他操作方法不得不被应用。尤其，随着它原始的应用在这个领域，HILIC使用一个极性固定相（有许多新的）和一个更高的有机流动相，例如乙腈（和水改性，作为强的洗脱剂）逐渐被用于极性代谢产物。在这种操作模式下，更加亲脂化合物很难吸附在固定相而很快被洗脱。但更多极性化合物易保留并且仅仅被洗脱当极性水溶液浓度增加时，HILIC有一个突出重要益处超过正相液相色谱，在水相样品有更大的兼容性在流动相中，简化了样品的引入。然而，HILIC有更低的在线容量比Rr