氨基酸测定方法
谷物籽粒色氨酸测定法1适用范围本标准适用于测定谷物籽粒色氨酸含量。2原理谷物蛋白质碱解后，降解成肽和游离的氨基酸。在酸性介质中，有硝酸盐存在条件下，色氨酸吲哚环与对二甲胺基苯甲醛反应，生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。3仪器、设备31分析天平，感量01mg。32实验室用粉碎机。33721型分光光度计，或相当的仪器。34离心机，4000rmi
。35培养箱。3620ml具塞刻度玻璃试管（须校准）。4试剂除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。41浓盐酸（GB62277），比重119。4210％盐酸溶液：227ml浓盐酸加水至100ml。435％对二甲胺基苯甲醛（HGB348662）溶液：5g对二甲胺基苯甲醛溶于10％盐酸中，并定容100ml。441％硝酸钠（GB63677）水溶液（mV）。注：4℃冰箱中保存，一周内使用有效。4510％氢氧化钾（GB230680）水溶液（mV）。46L色氨酸，层析纯。
f47L色氨酸标准溶液：准确称25mgL色氨酸（105℃干燥2h），加少量01molL氢氧化钠（GB62981）使之溶解，定量地转移到250ml棕色容量瓶中，用水定容。浓度为100μgml。
注：4℃冰箱中保存，一个月内使用有效。5试样的选取与制备51选取具有代表性谷物籽粒，挑拣干净，按四分法缩减取样，样量不得少于20g。籽粒充分风干后用粉碎机磨碎（带壳籽粒先脱壳），使95％以上通过025mm孔径筛。52按GB290682《谷类、油料作物种子粗脂肪测定法》脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入磨口瓶中备用。6校准曲线的绘制吸L色氨酸标准溶液02，03，04，05，06，07ml分别置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加1ml10％氢氧化钾溶液，摇匀；加02ml5％对二甲胺基苯甲醛，摇匀；加02ml1％硝酸钠，摇匀；将试管置于冰水中，再加5ml浓盐酸。取出试管，强烈振摇后放入25℃培养箱中显色75mi
（温度升到25℃时记时），取出后用水稀释至刻度，摇匀。以试剂空白作对照在590
m波长处测读吸光度。以色氨酸含量（μg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，参见附录A。7测定步骤71称样：称取40mg试样两份，准确至01mg，与此同时，另称样品，按GB352383《谷类、油料作物种子水分测定法》测定水分含量。
f72水解：将试样置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加1ml10％氢氧化钾，振摇，样品全部湿润后，放入40℃培养箱中水解16～18h。
73显色：从培养箱中取出试管冷至室温后加02ml5％对二甲胺基苯甲醛，摇匀；加02ml1％硝酸钠，摇匀r