速。
(3)链霉亲和素与生物素系统的应用
链霉亲和素(streptoavidi
,SA)和生物素(bioti
,B)是具有很强的非共价相互作用的一对化合物。一分子SA
可与4分子B相结合。在Elecsys的试剂中,SA通过特殊的蛋白结合物均匀牢固地包被在磁性微粒上,形成通用的能
与B结合的固相载体。另一试剂为与经活化的B衍生物化合的抗原或抗体。两种试剂混合时,B化合的抗原或抗体即
结合在磁性微粒上。
2、在试管中的反应
反应分两个步骤。以双抗体夹心法测抗原为例,试剂含以下组分:
a、Rubpy32标记的抗体
b、生物素化合的抗体
c、SA磁性微粒
d、TPA溶液
e、洗涤液
f(1)步骤一在试管中加试剂a、b及待测标本(含抗原),反应式如下(图3)。反应在液相中进行,37oC下5-10分钟内完成。
(2)步骤二:在上述反应液中加入试剂c,反应式如下(图4)。反应在接近液相的条件中进行,37OC下5-10分钟内完成。下一个步骤为结合的标记抗体与游离的标记抗体相分离,此步骤及以下的电化学发光反应,在Elecsys的流动池中进行。
f(二)流动池中的电化学发光反应1、流动池的基本结构流动池是电化学发光过程中所有电化学发光反应进行的场所(图5)。反应液由蠕动泵运送入流动池,反应后由流动池流出。一个激发电极在流动池的下方,两个测定电极安装在激发电极上方的两侧,留出一个清晰的窗口以便使发射的光子被光电倍增管收集。在流动池下装置可移动的用以吸引磁性微粒的磁铁。
2、电化学发光反应的步骤
f(1)将试管内两步反应结束的反应液输入流动池,由于磁铁吸引,磁性微粒被吸着在电极上,其余反应物流出流动池,完成游离的和结合的标记抗体的分离。(2)将TPA溶液送入流动池将残余的游离标记抗体排出流动池在流动池中充满TPA溶液。(3)撤下磁铁,电极上通电,三联吡啶钌与TPA发生电化学发光反应,发出的光被光电倍增管收集,测定光强度。(4)通过换算得出待测标本中的抗原浓度。(5)在流动池中送入清洗液,将反应物彻底冲洗,即可测定下一个标本。
一、主要技术特点1、电化学发光反应原理
化学发光剂三联吡啶钌Rubpy32和电子供体(TPA)在阳极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。二价的Rubpy32被氧化成三价,这是一种很强的氧化剂。TPA失去电子后被氧化成阳离子自由基TPA,它很不稳定,可自发地失去一个质子(H),形成自由基TPA,这是一种很强的还原剂,可将一个电子递给三价的Rubpy33使其形成激发态的Rubpy32。激发态的三联吡啶钌Rubpy32不r