电化学发光免疫测定
电化学发光免疫测定
电化学发光反应：电化学发光（electro－chemilumi
esce
ce，ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光两个过程。化学发光剂三联吡啶钌Rubpy32图1）和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应（图2）。二价的Rubpy32被氧化成三价，后者是一种强氧化剂。TPA被氧化成阳离子自由基TPA（参见图2），后者很不稳定，自发地失去一个质子（H），形成自由基TPA，这是一种非常强的还原剂。这两个高反应基团在电极表面迅速反应，三价的Rubpy33被还原形成激发态的二价Rubpy32，能量来源于Rubpy33和TPA之间存在的高电化学电位差。TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。接着激发态的Rubpy32衰减成基态的Rubpy32，同时发射一个波长620
m的光子。这一过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号得以增强。
图1三联吡啶钌NHS
H
TPA
TPA
Ru2＋Ru3
光子Ru2＋
fTPA
＋
e
e
＋
图2在电极表面的ECL反应
Ru2＋Ru3＋Ru2＋
Rubpy32Rubpy33Rubpy32
基态氧化态激发态

二、电化学发光免疫测定
以三联吡啶钌作为标记物，标记抗原或抗体，通过免疫反应及ECL反应，即可进行电化学发光免疫测定
（ECLIA）。在实际应用中则尚有特定的仪器和试剂。瑞士罗氏公司（ROCHE）的ElecsysECLIA系统，综合了各种先
进技术，具有独特的优越性，已在医学检验中取得广泛应用。
Elecsys全自动分析仪分成两个部分：在试管内化学反应部分和在流动池内的ECL反应部分。
（一）试管内的化学反应
1、试剂的组成
在Elecsys试剂的制备中，包括电化学发光剂的标记和抗原或抗体的固相化，应用了多种先进技术，简述如下：
（1）电化学发光剂的标记
Rubpy32需经化学修饰形成活化的衍生物后才能与抗体或抗原形成结合物。有多种活性基团可与Rubpy32
分子中的砒啶基反应。在Elecsys试剂中采用的是N羟基琥珀酰胺酯（NHS）（图1）。该衍生物具有水溶性，可与抗
体、蛋白质抗原、半抗原、激素、核酸等各种分子结合形成稳定的标记物。而且Rubpy32＋NHS分子量很小，与免疫
球蛋白结合的分子比超过20仍不会影响抗体的可溶性和免疫活性。
（2）固相载体
Elecsys中采用的固相载体是带有磁性的直径约28m的聚苯乙烯微粒。其特点是表面积极大，吸附效率高；在液
体中形成均匀的悬液，参与反应时类似液相，反应速度快。由于带有磁性，在游离标记物与结合标记物分离时，只需用
磁铁吸引，方便迅r