选取HC比值大的菌落移接到试管斜面上培养。此斜面可作复筛用。25蛋白酶产生菌的发酵与酶活力测定251蛋白酶产生菌的发酵（1）将保藏培养基中的产蛋白酶芽孢杆菌接种两环到种子培养液中，3032℃摇床发酵培养16h4℃冰箱保存。（2）取10ml含产蛋白酶芽孢杆菌的种子培养液接入含100ml酪素液体发酵培养基的250ml三角瓶中，3032℃摇床发酵培养，作为样一。（3）样一培养12h后，再取10ml含产蛋白酶芽孢杆菌的种子培养液接入含100ml酪素液体发酵培养基的250ml三角瓶中，3032℃摇床发酵培养，作为样二。（4）在发酵培养的48h内，每3h取一次样，每次取5ml放入10ml的离心管中，于4℃冰箱冷藏。（5）48h后将所有取样3000rpm离心10mi
，离心所得上清液680
m进行酶活力测定，每管沉淀加5ml蒸馏水600
m测生长曲线。252试剂和溶液2521福林试剂2522碳酸钠溶液cNa2CO304molL称取无水碳酸钠Na2CO3424g，用水溶解并定容至1000mL
f2523三氯乙酸cCCl3COOH04molL称取三氯乙酸654g用水溶解并定容至1000mL。2524氢氧化钠溶液cNaOH05molL按GB601配制。2525盐酸溶液cHCIlmolL及0lmolL按GB601配制。2526缓冲溶液a磷酸缓冲液pH75，适用于中性蛋白酶
称取磷酸氢二钠Na2HP0412H20602g和磷酸二氢钠NaH2PO42H2005g，加水溶解并定容至I000mL252710gL酪素溶液称取酪素1000g，精确至000lg，用少量05molL氢氧化钠溶液若酸性蛋白酶则用浓乳酸23滴湿润后，加人适量的各种适宜pH的缓冲溶液约80mL，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转人100mL容量瓶中，用适宜的pH缓冲溶液稀释至刻度。此溶液在冰箱内贮存，有效期为三天。2528l00gmLL酪氨酸标准溶液a称取预先于105℃干燥至恒重的L酪氨酸01000g，精确至00002g，用lmolL盐酸60mL溶解后定容至l00mL，即为lmgmL酪氨酸标准溶液。b吸取lmgmL酪氨酸标准溶液1000mL，用01molL盐酸定容至100mL，即得到l00gmLL一酩氨酸标准溶液。253分析步骤2531L酪氨酸标准曲线的绘制aL酪氨酸标准溶液的配制：
酪氨酸标准溶液的管号012345浓度gml01020304050
取100gmlL酪氨酸标准溶液的体积012345取水的体积ml1098765
fb分别取上述落液各100mL做平行试验，各加04molL碳酸钠溶液500mL福林试剂使用溶液100mL，置于40℃士02℃水浴中显色20mi
，取出，用分光光度计于波长680
m10mm比色皿，以不含酪氨酸的0管为空白，分别测定其吸光度。以吸光度A为纵坐标，酪氨酸的浓度c为横坐r