中，将此试管放入7580℃水浴中热处理10mi
，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100200μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置，于3032℃培养2448h；4）对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。23蛋白酶产生菌的筛选1）从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种含酪蛋白的斜面培养基，再点接于含酪蛋白的平板，3032℃培养2448h，测定平板上菌苔直径和水解圈直径。2）水解圈直径与菌落直径比值大的那个菌株对应的斜面培养物，可作为进行诱变选育或酶发酵、酶活力测定菌株。24蛋白酶产生菌的选育241紫外线对出发菌株的诱变效应1）菌悬液的制备：①取培养48小时生长旺盛的出发菌株斜面45支，用10ml无菌生理盐水将菌苔洗下，倒入盛有玻璃珠的小三角烧瓶中，振荡30分钟，以打碎菌块。②将上述菌液离心（3000rmi
，离心15分钟），弃去上清液，将菌体用无菌生理盐水洗涤23次，最后制成菌悬液。③用显微镜直接计数法计数，调整细胞浓度为每毫升108个。2）平板制作：将淀粉琼脂培养基溶化后，冷至55℃左右时倒平板27套，凝固后待用。
f3）紫外线处理：①将紫外线灯开关打开，预热约20分钟。②取直径6cm无菌平皿2套，分别加入上述调整好细胞浓度的菌悬液3ml，并放入一根无菌搅拌棒于平皿中。③将上述2套平皿先后置于磁力搅拌器上，打开皿盖，在距离为30cm，功率为15W的紫外线灯下分别搅拌照射1分钟和3分钟。盖上皿盖，关闭紫外灯。4）稀释：在红灯下，将上述经诱变处理的菌悬液以10倍稀释法稀释成101106（具体可按估计的存活率进行稀释）。5）涂平板：取104、105、106三个稀释度涂平板，每个稀释度涂平板3只，每只平板加稀释菌液01ml，用无菌玻璃刮棒涂匀。以同样操作，取未经紫外线处理的菌稀释液涂平板作对照。6）培养：将上述涂匀的平板，用黑布（或黑纸）包好，置37℃培养48小时。注意每个平皿背面要标明处理时间和稀释度。7）计数：将培养48小时后的平板取出进行细菌计数，根据对照平板上菌落数，计算出每毫升菌液中的活菌数。同样计算出紫外线处理1分钟、3分钟后的存活细胞数及其致死率。8）观察诱变效应：将细胞计数后的平板，分别向菌落数在56个左右的平板内加碘液数滴，在菌落周围将出现透明圈。分别测量透明圈直径与菌落直径并计算其比值（HC值）。与对照平板进行比较，根据结果，说明诱变效应。并r