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摇动,取出后用pH72PBS液洗涤3次。最后一次用含1%硼酸和1%兔血清的PBS液洗涤一次,离心去上清,再取此液3ml,混匀即可。同时以正常血清致敏的炭粒处理,以作对照。致敏血清(加1万硫柳汞防腐)于室温或4℃冰箱中保存,一年内有效。2.取洁净玻璃板一块,以玻璃铅笔划成小格,加被检标本010ml,再加免疫炭血清005ml,充分混匀,静止1mi
5mi
,判定结果。同时设三个对照:⑴免疫炭血清标准抗原。⑵正常炭血清标准抗原。
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f⑶正常炭血清加待检抗原。(四)结果判定在对照完全成立的情况下,判定本试验结果:“++++”:炭粉全部凝集,液体完全清亮透明。“+++”:炭粉大部分凝集,液体透明。“++”:炭粉一半凝集,液体较透明。“+”:炭粉微凝集,但与对照有差别,液体混浊。“”:炭粉不凝集,液体不透明。炭凝以“++”做为反应滴度的终点。
三、反向间接乳胶凝集反应
(一)原理同炭凝,只是载体换为聚苯乙烯乳胶,它是一种由06m~07m的颗粒所组成的胶体溶液,具有良好的吸附蛋白质的性能。间接乳胶凝集目前已用于鼠疫菌、沙门氏菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌、葡萄球菌肠毒素等的诊断。(二)材料与试剂1.聚苯乙烯乳胶2.免疫血清3.正常血清4.标准抗原5.待检抗原6.002MolLpH82硼酸缓冲液硼砂667g硼酸804gH2O加至1000ml7.生理盐水(三)操作方法1.乳胶液制备取聚苯乙烯乳胶010ml,加灭菌蒸馏水040ml,再加pH82硼酸缓冲液2ml,混合后即为25倍稀释的乳胶液。
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f2.乳胶致敏在上述乳胶液中滴加稀释的免疫血清020ml~070ml,边加边摇,当出现肉眼可见的颗粒后,仍继续加血清,直至颗粒消失,成为均匀的乳胶悬液为止。镜下检查应无自凝。使用时,应与一定稀释度的相应抗原出现阳性反应,与生理盐水出现阴性反应为合格。加防腐剂后,于冰箱内保存。注意防止冰冻。同时以正常血清代替免疫血清进行乳胶致敏,以作对照。3.取洁净玻板一块,用玻璃铅笔划成小格,滴加待检样品010ml,再滴加高免血清致敏乳胶001ml,以牙签或火柴杆混匀,在3mi
内判定结果。(四)结果判定“++++”:全部乳胶凝集,成絮状团块,液体清亮。“+++”:大部分乳胶凝集成较小的颗粒,液体清亮。“++”:半量乳胶凝集成细小颗粒,液体混浊。“+”:较少量的乳胶凝集成可见的细颗粒,液体混浊。“-”:全部乳胶仍为均匀液体,无颗粒。以“++”作为该反应滴度的终点。
四、间接红血球凝集反应
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