一．
ELISA实验原理：
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。二．实验材料与试剂配制：1仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。2洗液的配制：按130的比例配制洗液备用。三．样品收集、处理及保存1）细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。2）细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104106ml左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。3）血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。4）血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置1020分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上清。5）体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。6）组织标本：切取组织标本，称取重量05mg，加入500ul的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以20003000rmp离心20分钟，收集上清进行检测。样品中不能含有NaN3，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。7）保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，70℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。四．操作步骤：1）取出试剂盒，室温（2025℃）放置30分钟。2）分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。3）标准品的稀释：准备小试管6只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品r