稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀再在该试管中取100ul加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管
f中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0号标准品。注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。4）加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。5）温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。6）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒弃去，如此重复5次，拍干。7）加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。8）温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。9）洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置1530s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底拍干。10）显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。11）终止：2537℃下避光反应1015分钟，加入50ul终止液。12）读板：在450
m波长读取各孔的OD值。注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的30分钟内，以免影响准确性。五．数据计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。六．注意事项：1）实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。2）加样：加样时，要控制加样速度，避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。3）孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。4）建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。5）建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商联系，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，r